新手求脐带处理得到华通氏胶方法及注意事项

yooung

1.脐带用含100 U/ml 青霉素、100 mg/ml 链霉素的PBS 液反复冲洗，洗掉残留的血液。PS:青霉素主要针对革兰氏阳性菌，链霉素主要针对革兰氏阴性菌。# u- _& k; P! |6 c7 d
2.以上述描述的方法，剪为2-3厘米长的小段，除脐动静脉，得到华通胶。) }1 \6 a$ u& N# B
3.根据自己的需求确定培养方法：是组织块贴壁法，还是酶消化法？组织块贴壁法操作简单，培养出的MSC细胞稳定好，但是原代培养时间长，通常要2、3周时间，不过比较适合新手操作，如果不赶时间，可以选择该法；酶消化法，涉及参数较多，如样品使用量、胶原酶使用量、消化时间等，如果一个参数控制不好，就会影响MSC细胞的活性，不过得到的细胞数量多，培养时间比组织法短的多，适合大量原代细胞的需求。
* n6 A. L" A6 ~* a4.培养基的确定：通常用含胎牛血清的DMEM/F12培养，……4 G* n3 f2 T, ?( X
哦，好像离题了，请参照两点吧，后面的不舍得删，请pass掉。

yooung

回复 jddakui 的帖子1 y- T- Q4 |& T

- D' E5 l  w( O* ?' ]/ Q1 h1 {如果显微镜下看都不知道细胞的话，就可能是消化太过了，那你再调整一下样品量、胶原酶使用量（浓度）和消化时间这三个参数的比例吧。

jddakui

回复 yooung 的帖子/ D; Y- z; g3 h, h0 `
  U  l6 x8 v$ p& H" H4 r! B6 c
酶消化初始密度比较低，P0第6天才看见细胞，可以培养多久 ？时间长会不会分化？

yooung

回复 jddakui 的帖子. d3 u- u  m* M( }4 [% P! M' r5 A

8 B. w) ?" u8 k& G: o' \(我答案全是来源于文献和对文献的认识，并非实际操作经验所得，请谨慎参考！）
' z4 ?! w+ E& q; L6 B5 w" ]4 ~* \培养第5~7天才见细胞贴壁，这是很正常的情况啊。3 ?8 r& y5 f6 Q  D+ Z
细胞贴壁后注意及时换液。# j( T# \, l, ~, o; F% G
按常规来说，细胞融合到80%就可以消化了，因此，贴壁细胞少，你可以慢慢培养，一直到80%。5 S5 d$ y+ q: l8 W$ n& A' L
培养时间长应该不会分化，组织块法的培养时间为二十多天，其中爬出的细胞培养时间这么长，也不见细胞分化啊。不过注意及时几天换液。

jddakui

回复 yooung 的帖子& q' J+ L9 l6 c* k# G& o3 p

' o: V! F1 F/ i我继续观察一段时间吧  谢谢解答

yooung

回复 jddakui 的帖子
8 E) Y! Y. t* ]% A4 C5 T! R. |2 S# Q, r: F: P

firstaider

回复 Ivan0108 的帖子
/ [) e  d. \" J8 I  [, t' ]
2 ]" e6 f% q  _9 }3 F我们实验室是先把脐带剪成5、6CM长左右，然后在一端剪出一个豁口，将脐带纵向剖开，用带齿的镊子将两条脐动脉和一条脐静脉分离出来，动脉容易分离，脐静脉有点难分，技术活，熟练就容易了；将华通胶也就是脐带间充质一条条剥离出来，不要把表皮撕下来，白色的胶即是了。开始操作都很不容易，慢慢的就好了

晗晗

拿回来的脐带先用PBS冲洗几遍把血污都洗干净
! c$ y$ H' c8 `酶消化法$ D* V$ E# U$ k# [8 r6 o# u) u/ F, I
将脐带剪碎，然后转移到离心管中然后加酶消化，然后吸取消化液，加培养液，放到37℃5%CO2孵箱中培养
- R" J" T+ u9 h6 w) N组织块法- n& ^! J5 g" O, k+ Q/ e9 J
把脐带剪碎，然后用PBS冲洗一遍，然后放到另一个培养皿里，然后加入培养液，不要加太多，防止组织块飘起来，最后放到37℃5%CO2孵箱中培养; U/ `4 f4 R0 x7 s- W
如果是新手的话建议用组织块法
9 Q' r3 P. x  f2 o- G1 P# ^& q4 t7 w, T- Z

saliai2016

其实操作步骤并没有什么严格的限制，只要把最外面那层、静脉、动脉去掉，其他的留下就可以了，只要对各部分能够清楚的分辨，可以根据自己的操作习惯来调整的。