新手求脐带处理得到华通氏胶方法及注意事项

yooung

1.脐带用含100 U/ml 青霉素、100 mg/ml 链霉素的PBS 液反复冲洗，洗掉残留的血液。PS:青霉素主要针对革兰氏阳性菌，链霉素主要针对革兰氏阴性菌。1 W5 V3 o; H1 O- a* s4 g
2.以上述描述的方法，剪为2-3厘米长的小段，除脐动静脉，得到华通胶。
; k9 |- ~- \1 K: H( r3.根据自己的需求确定培养方法：是组织块贴壁法，还是酶消化法？组织块贴壁法操作简单，培养出的MSC细胞稳定好，但是原代培养时间长，通常要2、3周时间，不过比较适合新手操作，如果不赶时间，可以选择该法；酶消化法，涉及参数较多，如样品使用量、胶原酶使用量、消化时间等，如果一个参数控制不好，就会影响MSC细胞的活性，不过得到的细胞数量多，培养时间比组织法短的多，适合大量原代细胞的需求。
" @5 i  u: @1 @4.培养基的确定：通常用含胎牛血清的DMEM/F12培养，……
4 o% ^/ p4 H% e& L哦，好像离题了，请参照两点吧，后面的不舍得删，请pass掉。

yooung

回复 jddakui 的帖子. K1 k3 F* E, ^8 J
3 g7 n3 w2 ]. f4 k
如果显微镜下看都不知道细胞的话，就可能是消化太过了，那你再调整一下样品量、胶原酶使用量（浓度）和消化时间这三个参数的比例吧。

jddakui

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: Q' q2 m: ^0 `3 R# b, Z, _5 m7 S
酶消化初始密度比较低，P0第6天才看见细胞，可以培养多久 ？时间长会不会分化？

yooung

回复 jddakui 的帖子7 u, d+ K* Z5 U- p, h" N+ _
1 {; G$ {5 {' f6 X7 N! ]
(我答案全是来源于文献和对文献的认识，并非实际操作经验所得，请谨慎参考！）
* u3 w# @. N! [% T* G培养第5~7天才见细胞贴壁，这是很正常的情况啊。9 `! L5 K- Q; H
细胞贴壁后注意及时换液。$ |' S3 a; m# t1 f; q5 X; i
按常规来说，细胞融合到80%就可以消化了，因此，贴壁细胞少，你可以慢慢培养，一直到80%。
4 m& p6 B+ [$ k2 k, S培养时间长应该不会分化，组织块法的培养时间为二十多天，其中爬出的细胞培养时间这么长，也不见细胞分化啊。不过注意及时几天换液。

jddakui

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. s5 T/ U5 u8 Y
+ _! g1 K  H: O/ i- n/ S我继续观察一段时间吧  谢谢解答

yooung

回复 jddakui 的帖子
' [. L9 l0 ~+ v% r( M7 H3 Q$ ~8 {) ~& Q- h6 X

firstaider

回复 Ivan0108 的帖子# w' C9 d, w3 ?  V2 ~

9 q" D4 S! H7 ?' t3 W. j! {我们实验室是先把脐带剪成5、6CM长左右，然后在一端剪出一个豁口，将脐带纵向剖开，用带齿的镊子将两条脐动脉和一条脐静脉分离出来，动脉容易分离，脐静脉有点难分，技术活，熟练就容易了；将华通胶也就是脐带间充质一条条剥离出来，不要把表皮撕下来，白色的胶即是了。开始操作都很不容易，慢慢的就好了

晗晗

拿回来的脐带先用PBS冲洗几遍把血污都洗干净7 w0 S. \( M% u7 A% I
酶消化法- [0 T4 X( P1 F' a' Z2 e* L
将脐带剪碎，然后转移到离心管中然后加酶消化，然后吸取消化液，加培养液，放到37℃5%CO2孵箱中培养
/ R6 c9 _* i$ q, c2 b& X组织块法3 p/ s' {+ U+ X8 ]: Y& l- |" P" N
把脐带剪碎，然后用PBS冲洗一遍，然后放到另一个培养皿里，然后加入培养液，不要加太多，防止组织块飘起来，最后放到37℃5%CO2孵箱中培养3 q" X& x; e- T/ D
如果是新手的话建议用组织块法' f* O+ f- F) e" J4 I1 w0 W0 }
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saliai2016

其实操作步骤并没有什么严格的限制，只要把最外面那层、静脉、动脉去掉，其他的留下就可以了，只要对各部分能够清楚的分辨，可以根据自己的操作习惯来调整的。