细胞复苏失败原因？

lvyananwyb

谢谢各位的分析，细胞是别人冻存的间充质干细胞，以后复苏时会注意操作速度，以及复温时间的控制。

colins

我觉得如果经常做的话不至于因为复苏动作慢就导致细胞完全不长，完全没长的话就不单应该从操作上找问题，可以试着从细胞本身找原因，是不是在冻存时出问题了？如果是在学校的话，有没有可能你们的冰箱断过电啊，这些都有可能，我就遇到过。至于污染问题，我觉得最好自己真正检测一下，尤其是支援太，肉眼看不到的

cloudycity

我觉得是冻存前细胞就不行了，或者冻存的条件不行。你是在什么条件冻存的？冻存条件不是稳定超低温，就很伤了。& v) a/ r# S. t, m! U' R

9 _! z* P, t/ R; l, j复苏的话尽量快，我都是用40℃复苏的。你用的冻存也dmso比例是多少？我曾经试过msc在5%的dmso  37℃复苏后放置常温30min，活率都有6-7成。

chenlin080102

最佳的复苏过程应该是尽量缩短水浴锅溶解的时间，然后加入到预温好的培养基中，培养基体积至少是冻存细胞体积的9倍，也就是说要做10倍稀释；还有就是不建议刚复苏的细胞就离心，因为此时细胞很脆弱，建议第二天再离心换液。

woshibotao_01

觉得应该先想想冻存前冻存方法是否合理。如果合理，再找复苏的原因。
* [( p/ w- Z4 u复苏时水温在38度，将冻存管快速投进水中，并摇晃冻存管，使冷冻细胞悬液在一分钟之内融化，然后立即取出。
# H7 i0 K% Y, k- O9 |将细胞洗涤，目的是把DMSO洗掉，离心力不要太高。
5 g3 f1 e% {% v- ?$ O0 m0 {最后用平衡至室温的培养基培养。
! K; _4 \+ f: o! P8 K; V2 ~% M- a- x# }0 X/ @3 f6 F  m+ a! e

帝国黑骑士

楼上的前辈们说的都有道理并且比较全面了，细胞完全没有长，这个很奇怪，操作上的一些问题不会导致完全不长，所以我觉得最大的问题可能出在DMSO上，要么是冻存时出问题，要么是复苏时冻存液清洗不彻底，残留的冻存液对细胞生长有很大影响。建议再重做一组冻存复苏的实验，排查下原因。

zhrt

回复 lvyananwyb 的帖子- e; A6 |( t+ U% p) `$ E- h8 p

- ~& E. }% }6 M* b# m, U+ x/ \1.接种密度过低
0 ^4 @- J' [# J/ F2.细胞活性太低（1.酶消过长2.本身细胞状态不好）% |" R. h  }3 L% E9 S/ }. R$ V7 N
3.DMSO的浓度及添加时机

a2782953

回复 张钰0206 的帖子
5 }+ i+ T0 o# d5 r$ }! z: e$ [) h. O! ]+ M! w# y
我想问下，冰浴的生理盐水会减少细胞损伤的原理是什么呢？谢谢！

yuanyecat

复苏要素
# F+ b2 Y8 q( O; g9 z$ T' |第一，dmso必须洗干净，推荐用medium洗两次，1 I7 ]/ ^. r/ q6 Q8 m
第二，种密度适中，推荐100000-500000个每毫升