分离单核细胞时，如何吸取白膜层？

fenlichong

白膜层一般规范操作应该能观察到明显分层。操作时注意：1、待分离液恢复到室温后，将其从离心管底部加入，禁止沿管壁加入；2、将稀释后的血液沿离心管管壁缓慢加入，铺层要缓慢细心，控制血液流速以免流速太大而冲击铺层界面；3、盖好配平离心，全程动作务必小心，防止液面混合；4、离心完后，可见分层。用5ml移液管小心吸取白膜层，可边轻转离心管边吸，尽量吸干净。另：使用分离管分离白膜层效果较好，可试试。

维维睡啦

你用的多少毫升的离心管？先把最上层吸出来弃掉，再吸中层，白膜层以下、红细胞层以上的这一层要保持在0.5公分左右即可，这样可以尽量减少细胞损失，也不容易引入其他杂细胞，效果很好。

cloudycity

回复 lxy07 的帖子. T5 L7 @* ~( q, u% v

: O" x, c& q6 v1 k. b5 u没什么必要···个人觉得，只是追求技术上的完美···哈哈

cloudycity

你具体的操作是怎样的？
+ q8 E, |/ K- e: `* j6 d- G3 j血液如何稀释？在ficoll上铺血铺地好不好？血和ficoll的界面有没有被弄乱咯？如果都做好了还不明显。那就是太稀/血不行····
. S" |. [+ D) q
3 j! m- k/ _: L9 A# m/ E3 L. b

zz091115

15ml离心管比50ml的效果好 可能是液体张力的原因吧 还有个就是你离心结束一定要慢慢减速 不要迅速从400g降到0 这个非常重要

wanglinling

回复 lxy07 的帖子, t2 G7 Q! `# `

  J8 P7 s6 z, Z- k3 G去血浆是什么意思？怎么去的哦？

lxy07

回复 wanglinling 的帖子9 Z  X# u/ `' H3 _- }

( @7 Z" R3 ], u8 q4 T全血加入50ml离心管，2000rpm，15min，离心后会分层，然后把最上层的血浆吸掉。

wanglinling

回复 lxy07 的帖子( m3 A% q  j  d: j7 ~: Z
) H# [7 J( Z9 \1 u
你是白膜层一点都看不到还是只是细胞少而已

lxy07

回复 wanglinling 的帖子1 m1 m+ i8 l: ?$ h
9 G" l, A4 `; |  z
离心管平视的话，白膜层和分离液层基本分不清楚，混在一起了，从离心管上面俯视看的话，能看见白色云雾。

wanglinling

回复 lxy07 的帖子
  J4 @3 |2 d, H7 s) c* ~' X, w4 b& G. {9 w
那还是梯度没有弄好，换一种分离液试试吧，不知道你们用的哪种？