请问脐血来源DC培养贴壁问题

anzhida0823

脐血来源PMBC诱导培养成DC细胞时，首先需要将PMBC贴壁2h，然后用贴壁细胞诱导培养DC细胞，那么贴壁时间为什么是2h呢？如果贴壁时间长一点比如过夜贴壁会怎么样？会导致已贴壁细胞重新悬浮起来么？望各位高手前辈不吝赐教，感激涕零！

weijunning

贴壁的过程就是对细胞进行筛选的过程，我们是利用单个核细胞进行DC/CIK的诱导培养，单个核细胞主要包括两个细胞群：单核细胞群和淋巴细胞群。其中，使用单核细胞进行DC的诱导分化，使用淋巴细胞群进行CIK的诱导培养。在贴壁过程中，单核细胞能够进行贴壁，淋巴细胞还是悬浮状态，贴壁2小时后将未贴壁的细胞洗涤下来，进行CIK培养，贴壁的单核细胞进行DC的诱导培养。贴壁时间不能少于1小时，但也别太长过夜，因为贴壁的过程是在无血清的1640培养基中进行的，时间太长容易造成细胞饥饿，影响实验进程。

anzhida0823

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  m& e- c' H  r3 ~3 _3 p
6 E$ j: N9 E; x首先感谢您的指导！！！我从没有考虑过单核细胞还有分类的问题，学习了。其次我们培养DC用的是DMEM/F12培养基，也会有1640培养基营养不足的问题么？还有根据我的经验，过夜贴壁发现贴壁细胞比较少，贴壁2h在时间上特别不方便，因为我们分离脐血完毕后就已经是下午五六点了，在贴2h就晚上8点多了，对员工的身体健康是个很大的威胁。

六弦七品

不知道你们用脐血养DC做什么用，是想给病人回输呢还是只加到CIK里共培养，前者是一点用都没有，后者是加跟没加都差不多。

anzhida0823

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0 L1 x0 {8 N2 b& H* E" \; p, ~' c% f4 A( V# W
用作DC-CIK共培养，CIK中加入DC后增值速度会明显增加，这只是其中一个作用，我也在学习中，说一点作用也没有事不科学的，呵呵

六弦七品

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+ J  ^! S! J# U3 P' R
0 _2 f! S+ c- ]我们只有自体血才做DC-CIK共培养，DC要负载抗原，脐血CIK本来就很好养，加不加DC真的没多大影响，文献上报道的那些都不一定是真的，自己做了才知道。

weijunning

回复 anzhida0823 的帖子, K. E5 V: B! t2 N

& ]' l+ V, P5 n. F% w! S( P你们过夜贴壁之所以发现贴壁细胞比较少，就是因为贴壁时间太长，大部分细胞饿死了；不管你使用何种基础培养基进行贴壁筛选，贴壁时间控制在1~2小时最好，因为基础培养基中的营养毕竟很少，贴壁时间太长细胞就会饿死，大部分呈漂浮状态。你们可以安排下实验时间，一般分离脐血的操作大约花费1小时，贴壁1.5小时即可，总共是2.5小时，你们可以选择在下午13:30就开始实验，这样下班正好完成。