请各位大神帮忙看一下我的WesternBlot实验结果是什么原因

木三阿凉

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& Q8 @2 {, U, g: m7 z收到~！ 谢谢大神~

yuanyecat

抗体的特异性不高，而且你蛋白的上样量太大了

木三阿凉

回复 yuanyecat 的帖子: a: u3 Q( ^" w; B+ H

/ Z5 G* ]$ W* `哦~ 好的~ 收到！谢谢大神~

121qwq

好难看啊，都搞什么了

beyond2008

小蛋白要用12%的胶，配胶的时候一定要混匀。电泳时，60V 20-30min 浓缩胶，80v 分离胶，时间自己看。然后牛奶封闭过夜，以减少背景。

木三阿凉

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9 c& {7 c3 l3 y7 q# Y
' s: Z& Z/ B$ i8 m+ ^好的~ 多谢指点

2014052

单抗自己做的还是买的？这种实验最好有多抗，多抗是各种单抗混合物，其中会有不少亲和性较好，所以一般多抗做出来信号会强些，那么通过调整一些实验条件，就可以让自己的目的条带变得很清晰很好看，从你上样量那么多来看，抗体质量很一般

xcf20305

建议：$ @7 j0 G0 E$ b; h  a
1. 重新做胶，胶一定要做好，再跑PAGE，这样条带会干净漂亮一点；
; y$ P& w" A) k/ ~& H% S2. 条带不清晰，所以曝光时间过长，产生了杂带，因此建议缩短曝光时间；1 ?! V( r4 Z% N3 J% V- @; Y  I
3. 杂带处理：增加洗膜时间和次数。7 [2 y3 F1 d5 ~9 }% Q0 T

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木三阿凉

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2 O' K6 q1 G% _8 r( a6 ?0 e$ ^% L& Y, ?' B) z! C+ h
好的，谢谢~

realyy11

用传统胶片曝光的方法试一下吧  效果可能会提高一些