请各位大神帮忙看一下我的WesternBlot实验结果是什么原因

木三阿凉

回复 moluxingke 的帖子
$ L; w- v# j" p  S& D7 e" t9 G. [, j% b
收到~！ 谢谢大神~

yuanyecat

抗体的特异性不高，而且你蛋白的上样量太大了

木三阿凉

回复 yuanyecat 的帖子, e, M: N7 S- l7 ~- r4 \
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哦~ 好的~ 收到！谢谢大神~

121qwq

好难看啊，都搞什么了

beyond2008

小蛋白要用12%的胶，配胶的时候一定要混匀。电泳时，60V 20-30min 浓缩胶，80v 分离胶，时间自己看。然后牛奶封闭过夜，以减少背景。

木三阿凉

回复 beyond2008 的帖子5 M- x1 |6 H, i( t8 J
' p0 D2 b& N0 o$ ^
好的~ 多谢指点

2014052

单抗自己做的还是买的？这种实验最好有多抗，多抗是各种单抗混合物，其中会有不少亲和性较好，所以一般多抗做出来信号会强些，那么通过调整一些实验条件，就可以让自己的目的条带变得很清晰很好看，从你上样量那么多来看，抗体质量很一般

xcf20305

建议：
: a* P: N/ [5 K3 c% `3 u4 C1. 重新做胶，胶一定要做好，再跑PAGE，这样条带会干净漂亮一点；
- P$ w$ l+ E7 E& l" _7 Y6 q2 h  J& z2. 条带不清晰，所以曝光时间过长，产生了杂带，因此建议缩短曝光时间；
, q7 w3 M! W; j3. 杂带处理：增加洗膜时间和次数。6 A: e3 @  H# m( N3 `7 C0 W
$ y: m+ X: \  Q  K! l9 {8 c

木三阿凉

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; X5 A, e- Z% D& {8 N, _# b
- ^) T) u/ j$ {4 K3 C( A( k  c好的，谢谢~

realyy11

用传统胶片曝光的方法试一下吧  效果可能会提高一些