求助：关于质粒转染

weiyepan

回复 yinchong42 的帖子7 \6 h/ R" [0 [! M; T5 @% N  r

. d2 w7 _/ _- W. ]6 G1. 一般环状DNA在细胞内能维持3天以上，线性化的DNA有整合的概率，但是能维持的时间比较短。整合的不在瞬转的讨论范围之内。) E$ i5 c, z) H' K4 Z$ m
2. 考虑细胞分裂对DNA的稀释。细胞分裂的越快，稀释度越大，背景蛋白就越多。* ]0 I5 B2 \) R6 Q6 Y  F$ J
3. 所以蛋白的表达曲线以单个细胞（相同背景）计算，其实是一个抛物线。一开始DNA多，mRNA也稳定，表达水平相对较高。随着DNA的稀释，表达速度开始下降。降到什么时候到底，主要是看蛋白的降解速度，蛋白稳定的，可以维持15天以上（例如荧光蛋白），蛋白不稳定的，也差不多有5天（例如萤光酶素）。蛋白不会降解的，一般会对细胞造成影响，造成细胞死亡。

weiyepan

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8 o) W. h1 B  M  R, U质粒整合传代不稳定的，尤其是需要整合率比较低的情况下，传代容易丢。整合率低的普遍比整合率高的的长的速度快，传代次数越多，整合率低的占比会越来越重，蛋白表达量就会越来越低。转染能转进去的细胞种类最多只有30%左右，病毒能远远高于这个比例。另外电转也是有极限的，质粒大一点就进不去，容易把质粒电降解。

yinchong42

回复 weiyepan 的帖子7 A  H# H- h  N. k' I

# M+ H9 m$ C) `& Z( A( l2 o非常感谢您的帮助，其实稳定转染的话肯定还是病毒更靠谱，但我们也在考虑用质粒转染看看能否用G418筛选然后用做体外实验，体内实验的话我们的蛋白需要很长时间才能发挥作用，所以我们设计了五次注射，每次间隔15天，目前已经进行了两次，但我看别人的文章上最多也就是给两次作用，不知道质粒注射次数过多会不会有什么不好

weiyepan

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- e2 Q6 ?+ r4 f" X质粒注射你确定不会引起免疫？

yinchong42

回复 weiyepan 的帖子9 b0 U* T: v& o2 a- R! n
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目前只有注射带有表达蛋白的质粒会引起脾肿大，mock组未发现问题

weiyepan

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你注射到什么位置啊？

yinchong42

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5 d7 j+ z8 e+ t* g8 W# [' B4 z; c
! @1 [: M6 l2 o: J& r; A( d你好，不好意思没有及时回复，我注射的是颅骨皮下，现在问题已经解决了，少量注射和mock组是不会导致脾肿大的