Western 问题求助

zhu1019

关于“各个泳道的条带宽度不一致”的解决方法：上样前根据每孔的上样量，用1*loading buffer将每孔的上样体积调成一样的就可以了，跑出来的条带绝对一样宽，百试不爽。

顺其自然

回复 zhu1019 的帖子- F* O) W" K/ a5 R2 ?8 e4 A$ `

: y: y- M/ v$ ^+ O! L& r' A# D, g好的，非常感谢啊，我下次试试看。谢谢你啊！

顺其自然

回复 121qwq 的帖子3 p. U/ \$ U* x; J

' G! E7 }/ B5 Q! ]好的，我后面再多多注意。谢谢啊。

顺其自然

回复 edwardellen 的帖子9 Y% b, a3 J; p- x2 |% [# i; k
3 X8 P, c  t9 r7 @
样品是同一批提出来的，浓度都有测的，只是没有调成弄的一致，而只是通过调整加样体积使之加样量相同，然后再用1*loading buffer补充体积至相同。样品是我前面提取后煮沸放-20°冻存后取出自然融解并在上样前再次煮沸冷却后上样，这样处理有什么问题没？
6 o% U6 {0 o1 G+ j0 H制胶的过程中都还好。" G+ a* ^, R7 k3 g7 T
电泳用的是恒压，上下层胶的电压不一样，分别为：上层80V * 20min；下层110V * 80min，这个电泳程序有什么问题没？
+ o8 x8 G- J3 Q转膜是用的三明治法，夹板的过程中气体已经排干净的。
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8 N6 d4 I$ ?  {5 Q* `非常感谢你的解答，并在此期待你的进一步帮忙分析，谢谢！

edwardellen

回复 顺其自然 的帖子9 C1 M! }4 x, m6 Y
# ^: A) @' B7 S: p& C
我去~
# z+ t# @" @+ Q( g- K% W3 ^你这问题一年了都没解决么。。。
. X  i3 F2 C" B# `3 j% o& H! K蛋白浓度不一样，会导致条带挤压的，因为同等通电的情况下，电流什么的不一样，具体我也说不清，你可以用物理常识考虑一下。. k; U) z+ V4 A* Y, w+ N7 d- _
样品进行两次煮沸的意义是什么呢。7 D5 j6 H4 f! t0 m% ]' j! x9 }
气体排干净了不代表一个小气泡没有，只要有一个小气泡在样本条带上，转膜蛋白就过不去，没有蛋白，就标不上抗体，就会出现不均一的带。

sports123

我也出现过几次这种现象，可能原因是：1.转膜时不注意，可能膜被污染，或者滤纸不平整。4 ^9 {- b0 w$ G$ W5 B
2. 转膜槽的架子没有夹紧。% N% L  v. S1 M& M* \! v
3.抗体洗脱时未洗脱干净
. [- Z1 S% {0 a- [! v& i其实还有许多别的原因，操作时多注意一下，多练习几次，就可以了。

顺其自然

回复 edwardellen 的帖子# ~- V0 p3 d: b8 ~
2 n- g2 h& {# u) u7 s* B
哦，好的。谢谢你啊，哈哈哈~

顺其自然

回复 sports123 的帖子  h5 o  u  ~) M8 a8 {

/ i- n& ?- A( g. x+ v好的，非常感谢啊！: @: b- o6 D) W8 L% r: M' C
你上面提到的这几种可能我一直都没注意啊，后面再多多注意，谢谢你啊！