求助，我的细胞形态还是MSC吗？

sunnyhuan0629

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, \! x" F9 R4 M5 y' ~) T
mix么？你准备按照什么比例？这样操作估计更增加了不确定性吧

听不到

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- ], y0 q- V2 o. |1 D2 y" E  D6 n# k6 M, m
加bFGF的意思吗？因为看很多人说加这个效果更好，所以就加了，确实长得很快。是10ng/ml的

蜗牛爱贝贝

要是按照平时传代密度也换可以，不会出现大的问题的，顶多细胞多培养一天，不过现在你是直接复苏后种瓶，还是要大一点的，复苏后细胞活性太弱，不过你细胞应该没事的，就是细胞状态不太好，传代后应该就没啥问题了

听不到

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- W3 ~  R; M% M) Z: H$ D& y  s" M0 v+ M4 w
完全忘记之前说过了什么...回复的内容真是...: _% M% M4 J" {- T: |
我之前是想的是不是可以高糖低糖1:1来混合，二者应该就是糖浓度的区别吧，混合后不就糖浓度低了么？

sunnyhuan0629

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  K! s9 D  v% q/ D  L
哈哈，回复内容混淆了。不建议混合使用，你还得看是不是含有谷氨酰胺等，混合后会不会降低其浓度等。另外，你说的添加bFGF，肯定会使得细胞长势更好，因为表皮细胞生长因子会促使MSC增殖，且表现出相应的形态。

zhang0194

你从朋友那里要到的细胞是在养的? 还是他给你复苏的？0 m$ {7 {" Y9 {3 a# W" {8 s% ]$ @
如果是在养的就是代次太高，老化严重。如果是复苏的，你拿回来以后应该高密度传代后24H后冻存使用（如果一次用不完），如果你直接冻存了，能长这个样子要谢天谢地了。
3 p+ Z+ ~! q/ ?( T* H! _) e$ {再者就是培养体系的问题，更换培养液也会造成细胞形态剧烈改变（下次用你朋友的体系最好）。$ D" A0 Z( Q! r( P, N1 R$ I, R
一般情况下我们这种细胞是丢掉的，建议在重新分一根脐带  快的话半个月就能有一批新的细胞。带血清的培养体系建议原代10%FBS  传代5%FBS  加1%谷氨酰胺。BFGF 每支配1000ML。 个人经验，仅供参考！

听不到

回复 zhang0194 的帖子, a' J7 c" J* H* t/ ^: y/ s

7 _5 _! ?* @. X  h; L是我自己复苏的，然后传代又冻存的。
, X2 E8 N# M* f! U' R不过想知道bFGF每支是多少呢？5%FBS不会太少么？培养液是什么？DMEM/F12?低糖DMEM行么？

丨叶落知秋丨

首先考虑的事接种密度的问题，接种密度影响干细胞生长状态，部分干细胞具有一定的分泌性能，能够分泌一些对细胞有支持能力的因子类物质，所以必须维持一定的接种密度，否则会导致细胞增殖减慢，最后出现老化。另外，你应该多复苏一批做个比较，是不是这一批冻存的细胞状态都不好。别养了一段时间以后细胞恢复不到增殖期，所有工作全泡汤。