探讨DC-CIK的培养

老姜

个人见解：
* D" {, u' _- s* O% ~3 G1 培养瓶与培养袋的用途有别。当研究用细胞量不太大时用培养瓶即可，当进行人体输注用CIK细胞时，必须转入培养袋中培养，才能使细胞扩增达到治疗的数量。康宁公司的不同容量培养瓶侧边均标有最大容量，当培养细胞超过该容量就需转入大一号的容量瓶中培养细胞。当用于治疗量的细胞超过200mL时，均应转入培养袋中培养。最初将培养袋一折二，细胞在半个培养袋中培养，当培养液体大于500mL时，将培养袋展开培养细胞。培养袋的材料是透气的，培养细胞良好。
' Q5 p7 e. `4 n4 @  @9 t! ]/ W2 CIK细胞培养3天后，出现圆形的细胞团，说明细胞呈增殖状态。添液前用刻度吸管轻轻吹散则利于细胞的高效扩增。若是培养袋则可轻轻摇动培养袋使细胞散开。不主张成团状添液。

lzlmiranda

回复 hyg5481655 的帖子
  c( ]+ g6 y; Y, x) y+ v# ?# Z
. o. c5 c; O  p% Y$ Z8 \1，我检查了一下我们的流式结果，LYM占到全部的95%以上，你结果里两群细胞比例太分散，现在还不好说那些成分是什么，我觉得不一定是碎片。
/ {  F4 @) ~, p+ Q4 |1 f9 J5 h/ _2，培养体系你还是按照公开的方法来摸索，培养基用X-vivo，或者takara，等等。接种的细胞密度控制在1-1.5*10^6/ml，长到什么样的密度开始补液，你自己要摸索一下，和你用的培养基有关系。. l8 p* l* `1 A) k# m
3，瓶里培养基的体积没那么要求精确，corning或者NUNC的175培养瓶都可以加到125-150ml。
' ^: D  i* z% P2 i4，你说的应该是自体灭活血浆，浓度控制在5%以内，一般是2%，自体血清在我们这一行是采不到也不够用的。

hyg5481655

回复 老姜 的帖子
0 o' z0 c* r" l
, \5 [/ |0 ?1 ^. f谢谢您的回复。

hyg5481655

回复 lzlmiranda 的帖子5 l  B) ]/ p0 v2 X: m: _) f
2 V/ g* ^! N; k+ I; P
如果我们能做到95%估计也就没这样那样的问题了。$ [3 g) Q5 K$ _- [$ j1 }3 A* Y
上面那群应该是死细胞，前几天的样本做了一下分析：$ n4 m/ ?# B% e) X4 u
同型对照和样本：
* n9 J  k( b) j% h+ C2 j! {1 ?/ |% S9 u8 s1 n6 y+ f5 T

& L/ u) s, U  I可见绿色群CD3CD56双阴性6 y1 ]: ]% U7 m0 t
做了一个凋亡的双染检测
0 q: @1 `1 X1 E; }) ?! w
7 _0 [  U3 B5 ]" H3 s8 j/ b# }& m" ]0 c' _
可见即使不染荧光染料红色群也有非特异性荧光，样本组显示了大量处于晚期凋亡的细胞，而不是之前发帖说的坏死，肯定是有某种不利于细胞正常增殖的因素在作怪，问题是我们不知道问题出在哪里。8 M* V  T/ H2 |$ i3 N2 P