探讨DC-CIK的培养

老姜

个人见解：
& Y4 W+ w, l( y& l' }* R1 培养瓶与培养袋的用途有别。当研究用细胞量不太大时用培养瓶即可，当进行人体输注用CIK细胞时，必须转入培养袋中培养，才能使细胞扩增达到治疗的数量。康宁公司的不同容量培养瓶侧边均标有最大容量，当培养细胞超过该容量就需转入大一号的容量瓶中培养细胞。当用于治疗量的细胞超过200mL时，均应转入培养袋中培养。最初将培养袋一折二，细胞在半个培养袋中培养，当培养液体大于500mL时，将培养袋展开培养细胞。培养袋的材料是透气的，培养细胞良好。/ H  H) o! b9 b: E
2 CIK细胞培养3天后，出现圆形的细胞团，说明细胞呈增殖状态。添液前用刻度吸管轻轻吹散则利于细胞的高效扩增。若是培养袋则可轻轻摇动培养袋使细胞散开。不主张成团状添液。

lzlmiranda

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4 j# o- p" h4 B) B7 X% W+ l) P- C2 B
1，我检查了一下我们的流式结果，LYM占到全部的95%以上，你结果里两群细胞比例太分散，现在还不好说那些成分是什么，我觉得不一定是碎片。
" I: }+ s. C7 y5 R2，培养体系你还是按照公开的方法来摸索，培养基用X-vivo，或者takara，等等。接种的细胞密度控制在1-1.5*10^6/ml，长到什么样的密度开始补液，你自己要摸索一下，和你用的培养基有关系。
0 Q$ ?. X2 `6 p7 J3，瓶里培养基的体积没那么要求精确，corning或者NUNC的175培养瓶都可以加到125-150ml。* S* |5 t7 j% q5 U9 h! a- i
4，你说的应该是自体灭活血浆，浓度控制在5%以内，一般是2%，自体血清在我们这一行是采不到也不够用的。

hyg5481655

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" {  X/ l4 ]1 T# d$ B# Q谢谢您的回复。

hyg5481655

回复 lzlmiranda 的帖子/ y* {; V. Z  r! u
! U- s% f% u! A5 Y) s
如果我们能做到95%估计也就没这样那样的问题了。
! G% r! L  Q4 Z( m1 H上面那群应该是死细胞，前几天的样本做了一下分析：
9 a+ H$ R5 o5 W# ^! u( H同型对照和样本：
* a! o( V, U. _  u3 s, M/ ~0 q" m, E" @) T2 {! n3 p, D- l. G! W

4 v4 O) M: d& z- g- ]/ G可见绿色群CD3CD56双阴性  w* g: ^# Q' k
做了一个凋亡的双染检测6 P' j  l! O* W9 v

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可见即使不染荧光染料红色群也有非特异性荧光，样本组显示了大量处于晚期凋亡的细胞，而不是之前发帖说的坏死，肯定是有某种不利于细胞正常增殖的因素在作怪，问题是我们不知道问题出在哪里。
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