如何使淋巴细胞分离液密度梯度离心后分离的细胞层明显清晰？

地球外世界

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嗯嗯，谢谢指点

121qwq

主要是下降时加速度调到最慢，离心管在整个操作过程轻拿轻放。你能做到这个，基本上没问题了。

edwardellen

我们操作的经验是400g比较好，转数要根据你们的离心机自己调，离心20分钟，要用低温离心机，用透明度好的离心管。0 w* Z) G7 s3 i7 Z& ?# A- X# [/ V/ X
血可以用生理盐水1:1稀释混匀之后再加到分层液上。
( L. x7 ]' F: Q* a* j所有的操作，动作不要剧烈，心平气和，手要稳。
! E# o$ S1 j0 K8 F加血的时候，动作轻缓，将血滴到管壁上，让血滴慢慢滑落到分层液上。; y' }# v* b4 f
标记什么的提前做好，不要把东西都加完了，才想着标记什么的，晃动带样本的管子。
/ i. h, W. U5 P( m" p1 G离心结束后，尽快吸白膜层，尽量不要吸到分层液。$ v  ]5 X3 J; |4 u
如果你都做到了，还是分层不好，那有可能是血的问题，毕竟每个人的健康状况都不一样，不是每个人都跟教科书一样健康，个体差异都是难免的。

myylovewp

2000-2500转/分，一定把降速设置一下（慢降），温度也会有影响，要20度左右吧。

fangtaoye

要慢慢的把样品加到淋巴分离液，沿着管壁慢慢加入即可，我们的比例是分离液比样品1：2的比例，然样品浮在分离液上面，拿的时候千万小心，尽量不要晃动，另外，楼主的转速太快了，我们是600G，还有就是降速的时候尽量慢。

momoenn

1.离心时要慢升慢降；离心机要稳，你可以在离心的时候把离心机装满，不要只单独离心两个管。  c( z1 ^' {3 t2 b# `9 G
2.离心转速和血量也有很重要的关系，如果50ml以上血液，可以采用600g转速，离心25min试试。# S4 ^8 R  ]: _) D5 v7 c, [  C
3.离心效果和血液来源关系也不小，一样的过程，一样的条件，用外周血的话，白膜层回比较干净一些；但是如果是脐血，或多或少都会有红细胞。个人觉得ficoll分离用的是密度梯度离心，脐血各种细胞的密度和成人外周血相比可能还是有一定程度的差别。  Y/ v. P& O0 J- a) f
4.温度，一定要控制在20度左右，还是因为是密度梯度离心，各种试剂的密度都是在20度条件下测得。