关于胎盘造血干细胞的提取

pcljsw2008

回复 coffee.cat105 的帖子9 ]5 Q8 X* q5 q& ^

" U4 T. P0 x3 `; S/ W9 U7 a9 t应该是灌流成功能从脐带静脉收集到的血液就是无菌的，但是从母侧一面毛细血管由于压力过大或者其他原因而爆裂的所渗漏出来的血液洗液是染菌的，并不是血管内有菌，而是胎盘外侧百分之九十以上是污染的

pcljsw2008

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% f, a7 e  o8 k我灌流基本四个小时，药物的话文献说是胰酶胶原酶，但是时间一长血管变薄就会破裂，无法灌流。如果破碎法提取的话，一来是染菌是个大问题，二来细胞太杂乱，三来组织块碎片过筛后仍然会有极大的残留，这些就是瓶颈了

pcljsw2008

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' ~; ~) ]- P& d% z) ^/ ?+ g; {计数法相当于等同脐血量的30ml，看着多，实际上就只有表皮大血管有一些，毛细血管要么洗不出来，即便全洗出来了那也只有很少量的。挤压的话不太可行，会把毛细血管都压爆，渗透到母侧就全污染了，破碎法同样也是污染问题无法解决

baby00000003

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' O" X# w% h; S+ u6 S) N' [7 j9 l3 O0 ~7 i* a% \; }
这个污染的问题我还真是没想太多......; J3 T& [8 ~, k
用庆大PBS多洗洗然后就冻存了也凑合，能用得上HSC，之前估计免疫系统就全去了，回输时也要大剂量三联抗生素，有那么一丁丁菌可以容忍吧....

sdudai

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血管里灌流出来的无菌，绒毛渗漏出来的是染菌的

coffee.cat105

回复 sdudai 的帖子) {, T. u- Z8 s. z1 n- S, s

3 d9 {" p, m1 B* A; j% w0 g那你们有没有做过鉴定，胎盘里出来CD34+的细胞是造血干么？怎么我们得到的内皮祖占绝大多数？

sdudai

回复 pcljsw2008 的帖子+ p: X/ v: _* p* D5 o$ n9 i0 i3 H; W

+ [' z7 @' o" v1 B) w7 g4 u我灌流过6小时基本没问题。灌流液的问题。

sdudai

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) N9 p5 Z3 k$ Q) \; {" V& x2 j- {( V  U
确实内皮细胞数量占大多数的。

pangu01

这是韩教授专利里的胎盘造血干细胞提取方法：
. y4 S* L( _) ~% F(1) 采集胎盘及母血、脐带血， 对采集的样品进行相关病原微生物检测 ；将采集信息录入系统 ；
' c0 M9 L4 I6 u. q# J7 k  p(2) 绒毛膜组织块在无菌条件下， 用缓冲盐溶液反复冲洗， 清除其中的血凝块和积血 ；( l( S3 n3 M; \! L- X) ^
(3) 用酶消化的方法得到消化后的混合液， 将混合后的消化液用滤网过滤得到细胞悬液 ；
6 S; k/ c( b9 Z% _, \% f(4) 用离心法浓缩细胞悬液后加入沉淀剂， 并将其转入离心袋中 ；: U& d  r  y& u1 _
(5) 先用低离心力离心分离法将混合液中的红细胞和组织块杂质分离， 去除红细胞和组织块杂质 ；1 a8 I5 _  D  X
(6) 再用高离心力离心分离法将离心袋中的有核细胞浓缩， 获得富含 CD133 阳性细胞的混合物 ；
* N5 q% \: O7 A9 E8 ?2 u5 ^(7) 将离心袋中的胎盘造血干细胞转移至冻存管 / 袋中， 并加入冻存保护剂 ；- Q- i8 ?4 @+ u6 {+ @7 _% O
(8) 将加有冻存保护剂的胎盘造血干细胞降温， 放入液氮暂存库暂存 ；
9 c9 V3 z4 _" {' q! @8 ~(9) 对分离后细胞进行 HLA 配型、 CD133 阳性细胞含量检测、单核细胞计数、内毒素和微生物检测检测， 将合格细胞转入液氮长期保存， 并将相关信息录入系统。0 K  a+ f+ y+ {/ A! t
根据上述方法， 我们达到了以下效果 (1) 可以对整个胎盘进行处理 ；(2) 处理时间短， 只有 3 个小时左右， 最大程度的保持细胞特性 ；(3) 细胞数量多， 可达 5-10× 109 个 / 胎盘 ；(4) CD133 阳性率高， 达到 3. 0-6. 0％， 完全可以满足成人多次使用 ；(5) 本发明最大的优点是直接从胎盘组织中富集足够数量的 CD133 阳性干细胞。
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8 Q. p, K1 D0 F( I4 m; \% w0 J. f; e9 A- ?8 t5 Y/ N

zfn0843086007

采用灌流这个操作，必须在婴儿出生不久采用灌流装置进行，，如果时间就了胎盘里面的血液会凝固，灌流效果不好，而且很容易污染，还有这边做过灌流，的出来的单核细胞数量不是很多，很难达到文献上说的那个数量。