干细胞老化的问题

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接种密度低的话也会出现这种现象，最好以10的5次方接种

yooung

回复 tingting2113 的帖子: E: K" {& q# w: J' l

1 e0 C3 }- ]( \好像在一篇文献中看过，华氏胶组织块在高浓度谷氨酰胺的DMEM培养液中培养3周，细胞体积和细胞核明显增大，细胞呈不规则的多角形。因为细胞培养液中的谷氨酰胺分解产生大量有较强细胞毒性的氨，所以原代培养的培养应尽量新鲜配制，不需要另外添加高浓度的谷氨酰胺。
) {& K1 D0 c* {2 D0 ?6 Z3 q不知道是不是你这种情况。

yooung

回复 tingting2113 的帖子! l( |% `% d. I" e6 l
! j3 _8 ~# S2 S
刚才找到了那篇文献，你可以看看。5 ~% L* ]. g2 d- ]

woshibotao_01

如果你细胞冻之前形态不错的话，而复苏后形态不好，老化，原因我猜测，一是你复苏后接种密度是否过小？二是你的培养基是不是用的和冻存前一模一样？

雁南飞

看看培养基和血清是不是过期了，或者存放的温度不对，培养基和血清的可能性比较大。

海南小石

感谢分享，学习了

swtarron

回复 tingting2113 的帖子$ a# v4 B, r* r6 T

0 p3 ?; B& X5 c# Q3 `5 v: [待未完全融化？？+ R4 ~( D! L& R9 a# O
我们复苏的标准时冻存管不能有一点没有融化的，不然复苏的效果就不好，甚至有的时候我们还要看到完全融化后，再放进水浴锅中10s左右。你们复苏的操作标准和我们不一样？

tingting2113

回复 yooung 的帖子! C# C5 N% I4 k3 [) o

: M, `! T: U4 t' x非常感谢！！

angel-niu

你的细胞是第2-3代，细胞活力应该最旺盛了。从图上看，胞质增加，胞核分裂并没有变大，所以，应该不是老化，像是过劳的“young cell”。如果细胞没有反复冻融的话，是你的复苏过程某个环节出了问题。
7 w7 `: Z, c9 A2 l+ h' N3 @; P1.细胞溶解后，加入培养基，不要吹打和晃动，因为这时细胞最脆弱，任何外力，都会给细胞带来致命的损伤。
% O* [" j1 H% I4 u' ^2.复苏后不要离心，第2天时直接更换培养液，去掉DMSO。& m0 b, n& L+ |: w4 d2 L9 e/ Q
3.冻时间长的话，细胞会丢失很多，加大接种密度。+ o; ]+ N7 o: _" q

海南小石

一般情况下，冻存后的细胞的活力都是不太好的。
  s& v! j1 n' W9 b, e
' O# T! N3 X% J6 O2 u/ i恢复活力的常用办法除了添加新鲜培养基之外，还可以往培养基内添加一些细胞因子，白细胞蛋白，灭活的血清等等。细胞的密度也是影响细胞生长的因素。