干细胞老化的问题

121qwq

接种密度低的话也会出现这种现象，最好以10的5次方接种

yooung

回复 tingting2113 的帖子2 [2 O" f& }4 g% s& {
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好像在一篇文献中看过，华氏胶组织块在高浓度谷氨酰胺的DMEM培养液中培养3周，细胞体积和细胞核明显增大，细胞呈不规则的多角形。因为细胞培养液中的谷氨酰胺分解产生大量有较强细胞毒性的氨，所以原代培养的培养应尽量新鲜配制，不需要另外添加高浓度的谷氨酰胺。& _9 P) A* P6 o- M; T* S
不知道是不是你这种情况。

yooung

回复 tingting2113 的帖子! {* k9 Y/ F$ z
2 U& F8 I8 k# m) _, a  O# l( ~
刚才找到了那篇文献，你可以看看。
+ R9 E* `: L  d1 Q  B) U

woshibotao_01

如果你细胞冻之前形态不错的话，而复苏后形态不好，老化，原因我猜测，一是你复苏后接种密度是否过小？二是你的培养基是不是用的和冻存前一模一样？

雁南飞

看看培养基和血清是不是过期了，或者存放的温度不对，培养基和血清的可能性比较大。

海南小石

感谢分享，学习了

swtarron

回复 tingting2113 的帖子7 t1 D1 k7 t; B" b' t! \) M

' {3 }9 T7 ~4 x5 G- h待未完全融化？？9 v; N9 P, g4 z4 r3 J  U3 O
我们复苏的标准时冻存管不能有一点没有融化的，不然复苏的效果就不好，甚至有的时候我们还要看到完全融化后，再放进水浴锅中10s左右。你们复苏的操作标准和我们不一样？

tingting2113

回复 yooung 的帖子
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非常感谢！！

angel-niu

你的细胞是第2-3代，细胞活力应该最旺盛了。从图上看，胞质增加，胞核分裂并没有变大，所以，应该不是老化，像是过劳的“young cell”。如果细胞没有反复冻融的话，是你的复苏过程某个环节出了问题。. u( d" E! k# B: S+ ^9 Z; a
1.细胞溶解后，加入培养基，不要吹打和晃动，因为这时细胞最脆弱，任何外力，都会给细胞带来致命的损伤。! H* @( [! K4 J2 R
2.复苏后不要离心，第2天时直接更换培养液，去掉DMSO。
3 u: [* `* E+ x0 k5 z3.冻时间长的话，细胞会丢失很多，加大接种密度。
: E2 W$ ]9 Q6 x: u. L. x

海南小石

一般情况下，冻存后的细胞的活力都是不太好的。; R7 n: C% L/ A, e/ |
& N% ^# d) Q% i3 e
恢复活力的常用办法除了添加新鲜培养基之外，还可以往培养基内添加一些细胞因子，白细胞蛋白，灭活的血清等等。细胞的密度也是影响细胞生长的因素。