关于脐带贴壁的问题

2013sp

这有很多因素:1、脐带的粗细，粗的饱满的较好。2、前五天不要移动。3、培养液血清浓度可以提高至15%。

yooung

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看细胞密度，一般二三十ml（传代培养）

yooung

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( Y$ x2 l0 K1 x$ f" y3 p# P
! o' d: g1 Y9 x) |6 o一看培养基，进口的，含10%胎牛血清的培养基原代培养效果好些0 q; h4 l- C$ S1 I8 S7 m) e( ~
二是贴组织块，方法很多，可用25cm2培养瓶，将组织块贴上之后，竖直放置，加1ml培养基后放入培养箱放置2~4小时，再平放培养瓶，使组织块完全进入培养基中，继续培养，3天换一次培养液。( E4 T2 x: e" y1 p3 I
三是培养箱环境对不对？5%co2,37度，饱和水气。

tlms1991

回复 zengping120919 的帖子6 v$ B4 N2 V0 I2 ^6 n
3 [) i& |% P2 q0 J: M  U, z
可不可以详细介绍下你的做法？我的都是20来天才爬出来，最近竟然都没有动静了。

zengping120919

我们实验室培养感觉挺简单的，没有他们说的那么复杂，脐带从手术室拿出来是放在加了双抗的生理盐水里。处理脐带时，先将整根脐带用PBS溶液洗一遍，然后用75%酒精浸泡大概5分钟，主要是消毒，并且会让脐带表面的羊膜皱起，便于后续处理，在将整根脐带放在PBS溶液中，并将脐带剪成2-3cm的小段。另取一个无菌的玻璃平皿，用来分离脐带，主要是逐段去掉羊膜、动脉和静脉（注意动脉和静脉周围的组织一定要尽量保留，华通胶一定要保留，而且在分离脐带的过程中不能用溶液浸泡分离好的组织），待所有小段都处理好后，将组织剪碎成1mm3的小块，用少量含10%FBS的培养基接种。我们用的是10CM的培养皿，每个皿大概13-15mL培养基。将培养皿放入细胞培养箱中，前三天尽量不要动。如果发现培养基过少，可以适当补液，每个皿大概补2-3mL。除非脐带非常不好，一般一个星期就能长出来，好的话四五天，慢的话不会超过十天。不过我们在培养过程中发现，FBS 真的非常重要，并不是说只要是进口的就一定能长出来，有的批次就是不适合养间充质干细胞。如果你的细胞一段时间内都长不好的话，建议可以换个批次的FBS试试。还有期待尽量选新鲜点饱满的，胶质多的话就更好了。

zsykdx

是不是培养的时间不够？原代培养一般需要7-14天才能爬出细胞，而且在培养过程中不要经常摇晃培养皿。

正义的花生

回复 zengping120919 的帖子6 ~1 L6 R& `4 P+ u% U- s1 r% o

! G; A$ ^' l3 g: q5 N) u( m1 `分离好的组织市剪碎之后就直接种瓶吗？  G& U# }  t( p- I" y- z% R
我现在是把分离好的组织先放在个加了生理盐水的培养皿，全部处理完后加到离心管里离心一下才种的

tlms1991

回复 zengping120919 的帖子8 k, A6 w$ o3 i* t

8 X  k5 N+ h# {& H非常感谢！

tlms1991

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求详细方法。

zengping120919

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& L7 N& _; I, I* W) M- L6 U0 O, l8 }把所有的组织全部剪碎后直接接种的，要不不好贴壁的吧