神经干细胞培养死亡原因 求解 神经（附图）

huangfei2010

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小弟我第一次养神经干细胞，按照文献上的培养方法，需要DMEM/F12培养液，2%B27,EGF和b-FGF，20ng/ml,但是第一养细胞导师就让我只有DMEM/F12基础培养液，细胞开始几天还生长，形成细胞团，大约在7天左右，也就是第一次离心半量换液后，细胞开始大量死亡。培养过程中无污染，导师问起死亡原因，我告诉他说没有生长因子，不能长久生长，结果导师震怒说没有生长因子细胞只是增殖速度慢，也不会死啊。结果小弟被踢出实验室，回去面壁思过。（附注，我导师也没养过神经干细胞），求哪位高手能告知神经干细胞在基础培养液培养条件下死亡可能原因，附上几张照片，高手可以帮我看看那是不是神经球,谢谢大家！
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海洋注：原图片较大，为保证浏览速度，做了修改 点击可看大图 作者原图片进行了压缩，有需要的胞友可以下载附件
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huangfei2010

回复 2# future007
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* i- I  z$ W; I$ w6 N5 ]    谢谢，我以前看过一些文献，说加了生长因子以后基础培养液就变成了条件培养液，有利于神经干细胞生长。

huangfei2010

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回复 4# grape ) Q1 a; ^* _1 v

; E- u6 Q, i6 U  u' }谢谢你提醒了我，我的离心转速是1000r/min,5min，离心前细胞还很多小的细胞团，离心后细胞成单细胞状态，培养几天也没有细胞团形成。另传2张细胞离心前后照片，请你看下

huangfei2010

回复 5# tommary 6 m3 w% Z9 Z2 u, a# F9 X# ]
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    谢谢回复，在培养过程中因为怕干细胞分化，没有加胎牛血清。不过PH倒是没注意，请问你神经干细胞适合培养的PH是多少啊，如何及时调整pH？谢谢

huangfei2010

回复 8# 军医
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谢谢回复，因为我是第一养神经干细胞，想看看神经球的形成，加了胎牛血清以后神经干细胞就分化了，不一定能看到神经球，所以及没加，可能也是细胞死亡的一样原因，刚查阅了一篇文献，在基础培养基条件下神经干细胞6天左右死亡，加了生长因子的实验组能正常生长。不知这是不是意味着生长因子是必须要加的？

huangfei2010

回复 11# huangzhenbo131 $ v7 p$ i/ s- {  H
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    谢谢回复，知识渊博，对我帮助挺大的。还有一个重要问题，就是神经干细胞机械法和酶消化法那个更好，我用的是机械法，文献上都说机械法效果更好，但导师坚持用酶消化法。还有你能把关于有关神经干细胞必须培养成分标题告诉我，我上Pubmed查查，空口无凭，我无法说服导师啊。万分感谢

huangfei2010

回复 12# 圆圆850
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5 z; e/ U' z! ?: ]/ z6 K2 L: G! K    谢谢师姐啊，你说的方法很好呢，只可惜我被踢出实验室了。

huangfei2010

回复 11# huangzhenbo131 ) y% }' [5 i, w
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    咨询版主，昨天我查了一些资料，说从胎鼠脑组织中提取的神经干细胞数量极少，大多是其他种类的干细胞和细胞碎片，用加了EGF/bFGF的选择培养基大约只有1%的细胞存活，存活的大多是神经干细胞，那么就从我离心前的照片来看，细胞大量形成细胞团，不太可能都是神经干细胞球，有没有可能是其他干细胞增殖形成的呢？期待版主回答，谢谢

huangfei2010

回复 20# ziyunfei1982
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    谢谢版主回复，我不是省钱，是我导师没有认识的生长因子的重要性，他后来将细胞死亡原因归咎于我没有加胎牛血清，我是欲哭无泪啊，请问版主，加了胎牛血清后神经干细胞分化，这些分化细胞大概在加了血清的培养基中可以长期生存吗？因为我导师以后很可能还是让我先加胎牛血清试养，我也不想和他再争辩了，所以我先问问你心里有个底啊，文献上都说加了生长因子后神经干细胞大量增殖，撤掉生长因子加胎牛血清神干分化，可以生长一段时间。

huangfei2010

回复 18# huangzhenbo131 4 S( h5 J+ h" T* I  m9 y

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    谢谢版主，我在问一个问题，您说了从胎鼠脑组织分离出来的细胞是神经前体细胞，神经祖细胞，神经干细胞，这些以后都还能发育成神经细胞，有没有其他非神经系列的干细胞呢？