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标题: 大家帮我看看我的脐带干细胞还能活不？ [打印本页]

作者: luckzhuo1982 时间: 2010-5-19 14:07 标题: 大家帮我看看我的脐带干细胞还能活不？

0 f7 U% M6 i3 V' ~
这是脐带干细胞，大概养了20天了，大家看看看还有希望不？/ F) w3 x6 i7 ?' x( e; P5 r
还有我一直没加生长因子啥的？不知道谁有作出来的实验方案借看看！谢谢

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作者: zhangmingqi111 时间: 2010-5-19 15:04

能活，你做的很好

作者: wuxiao101325 时间: 2010-5-19 16:20

请问楼主用的什么培养基？血清是什么？
据我们实验室培养脐带间充质干细胞的经验，我们用DMEM/F12培养基，15%FBS，10天左右就会有较大的细胞克隆出现并可以传代，而且细胞形态多为纤维状，也有扁平状的，至于楼主的细胞，我胞龄尚浅还没见过，能解释一下么？

作者: wuxiao101325 时间: 2010-5-19 16:24

可以参考本实验室操作规程：( O2 m s [3 G8 b
http://www.stemcell8.cn/thread-18220-1-1.html

作者: cl5823283 时间: 2010-5-19 16:35

20天估计活不了了。原代8天就传代了

作者: realinter 时间: 2010-5-19 16:50

我也觉得活不了，20天还都没见到克隆形成，应该是没希望了，你可以把具体步骤贴出来大家一起来讨论一下找找原因。

作者: decloud2009 时间: 2010-5-19 19:07

路过，好像好多死细胞啊。。。。。。

作者: deshenglll 时间: 2010-5-19 20:00

好象死细胞很多啊

作者: deshenglll 时间: 2010-5-19 20:02

没啥希望了。再重养一次吧。

作者: wgydys 时间: 2010-5-20 12:07

1.至少现在能活，+ \/ z( H* v% ] L) ?
2.没加生长因子还能这样，很好，
3.加了生长因子会长的更好

作者: luckzhuo1982 时间: 2010-5-20 15:01

回复 4# wuxiao101325 ! K! ]8 c: a- U0 [ D% P

0 R& V4 F7 N2 c- ?1 w3 A8 u3 e$ x
我就是采用这个网址做的，你能把你做的方法或经验传授一下嘛？

作者: luckzhuo1982 时间: 2010-5-20 15:03

我采用的就是论坛里的方法，用的是10%FBSDMEM/F12

作者: luckzhuo1982 时间: 2010-5-20 15:04

我把三根血管剔除后，剪断直接培养的也就是组织贴壁法！

作者: 飞翔 时间: 2010-5-20 15:33

死细胞很多，未见活细胞，不会活了

作者: wuxiao101325 时间: 2010-5-20 15:55

回复 13# luckzhuo1982
我们做的时候没有剔除血管，也没用组织块贴壁法（太慢），我们用的混合酶（胶原酶+胰酶）消化法（脐带组织剪碎后加消化液37°恒温摇床1小时），直接接种不过滤也不离心，消化液是很黏，但是没关系，如用25cm2瓶的话，4ml消化液再加2~3ml新鲜培养基即可，3d换液，传代时间视细胞生长情况而定

作者: dyswgy 时间: 2010-5-20 16:52

1.没问题，细胞活的好，但不是最佳状况，与无血清，无生长因子有关, ]$ i6 T9 ^) g# P8 q
2.加入生长因子后，细胞状况会好转。

作者: wujinglei 时间: 2010-5-22 00:06

你养的细胞形态是圆形的，但是我看到很多文献里脐带间充质干细胞都是梭形或纤维形，还有，你第一张图片好像染菌了

作者: 天蝎 时间: 2010-5-23 09:10

细胞已有污染，死细胞较多。

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