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标题: Peprotech公司的EGF,b-FGF生长因子如何分装？ [打印本页]

作者: huangfei2010 时间: 2010-9-15 17:12 标题: Peprotech公司的EGF,b-FGF生长因子如何分装？

大家好！
小弟第一次养神经干细胞，买了Peprotech公司的EGF,b-FGF生长因子，但是现在对于分装有一些疑惑？请问大家是用双蒸水溶解吗？分装的用什么缓冲液啊？说明书上说用的事0.1%的BSA，请问大家这个BSA对于无血清培养的神经干细胞有影响吗？网上好多人都是用直接用双蒸水直接溶解分装，或者用细胞培养液溶解分装，这样可以吗？谢谢大家指点

作者: 深海寂寞鱼 时间: 2010-9-16 08:08

to huangfei2010：8 @ f7 J/ s o! h: v% z7 z
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直接用培养基溶解就可以了，然后按你需要的量分装，然后－20 oC保存。1 N/ ?* A2 w" N T, Y" N$ L8 ?( x. e" T6 j

我们实验室买的是1mg／支的包装。一般是用1ml的培养基溶解，然后分装成10ug／支。这样一支加到500ml培养基里终浓度刚好是20ng／ml。

当然，也有实验室是直接往培养皿或培养瓶里加，那样的话你就要再稀释一下，然后放在4oC，用的时候按需要的体积直接加到培养皿或培养瓶里。

作者: zhaokun826 时间: 2010-9-16 16:24

学习了~~- X n% }9 \) l# u
不懂哦~~我是按说明书上0.1%BSA分装的。。。全部弄在一起了
楼上的方法好啊~~

作者: fjmedzengyue 时间: 2010-12-31 09:37

谢谢，正犯愁呢! H( |! o( L$ ~) i) A S# E' Y5 r

作者: cookiezhang 时间: 2011-3-31 14:37

回复 huangfei2010 的帖子3 r4 x O. q& A" o. r/ a0 p

你好，我现在也遇到这个问题了呢，说明书上两种分别用TRIS和WATER溶解，然后用含BSA的溶液稀释保存，这个BSA是哪种啊？你们后来是怎么做的啊？能仔细说一下吗？谢谢！！！！！！

作者: 郭少爷 时间: 2011-3-31 15:24

用tris溶解~~~

作者: huozhicb 时间: 2011-5-9 09:08

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你好，我用的是和你一样的因子，是按说明书推荐的方法分装的，但是养的细胞一直不大好，正在找原因，我也注意到稀释液里痕量的BSA可能对细胞产生影响，所以想问下你养的细胞怎么样？请尽快回复，谢谢！

作者: OBGYNob 时间: 2011-7-26 16:53

正好需要，万分感谢...

作者: daviegao 时间: 2011-8-8 21:43

PBS +0.1%BSA 即可。或培养基代替PBS。

作者: jjxsd1986 时间: 2011-9-1 13:54

Peprotech的EGF第一步要求是用Water来重悬的，即离心过后用高压灭菌过的双蒸水或三蒸水(最好不要用去离子水，偏酸性)溶解，bFGF要求用5mM，PH7.6的Tris溶液重悬(不同批次的有可能会有不同)，可以用移液器吹一吹加速溶解，重悬好之后用含有载体蛋白的溶液(比如含0.1%BSA的PBS或含10%血清的DMEM之类的)来进一步稀释一下，再分装冻存到-20度或-80度就可以了，避免反复冻融。
其实第一步重悬用的溶液很关键的，要求用水就最好不要用PBS之类的，而且PH对于细胞因子的活性也是很重要的，之所以加Tris碱溶解也与其PH有关系的，运气好的时候随便加什么溶液都可以溶解掉，但有时候加了PBS进去甚至都溶解不掉，所以最好严格照说明书操作。

作者: yinjiqingqq 时间: 2011-9-5 10:27

BSA是牛血清白蛋白，个人认为对无血清培养的神经干影响应该不大，你用0.1%的浓度做储存液，添加到bFGF，EGF中浓度就被稀释了，建议你还是按照说明书去配制。

作者: coffee.cat105 时间: 2011-9-14 16:13

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我们现在养也是用培养基稀释的，可是培养基不是不能-20的吗？我们在这个问题上纠结了很几天了

作者: xinxinyua 时间: 2012-4-15 22:12

个人觉得按照说明书稀释比较靠谱。稀释后可以分装，储存到-80℃，用多少，拿多少。这样可以有效避免失活。不知大家意下如何？

作者: huangcong1988 时间: 2012-4-16 09:53

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b-FGF是哪个货号的？Peprotech公司这个生长因子种类很多啊，哪种货号的比较好呢？

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