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标题: miRNA引物 [打印本页]

作者: kaxdd 时间: 2011-7-10 20:40 标题: miRNA引物

我要鉴定miRNA，想问下，miRNA的特异引物怎么设计。对这方面了解很少，希望大家多多指点，谢谢。

作者: runsong 时间: 2011-7-10 21:59

不太容易一下子讲清楚。0 H+ d% s7 v9 A' I# B8 d/ m
我们这里用所研究的miRNA的特异性颈环反转录引物分别反转录出各自miRNA的“cDNA”，同时在“cDNA”中引入通用序列。
再设计miRNA的特异性上游引物，连同下游通用引物做定量PCR.
不清楚的话再与我联系吧。

作者: langziforever 时间: 2011-7-10 22:18

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. z# q/ D, D. @: g8 W
这个问题不知道怎么回答你，按照你的意思，应该是你已经知道了这个miRNA的序列，而你的目的是要在不同条件下检测miRNA的表达？那如果是这样的话，你要设计引物，应该是想要使用realtime PCR的方法来检测，由于miRNA太小，所以，设计引物的选择很少，所以，也相对比较简单，目前有很多商业的试剂盒可以选用，需要你可以自己去搜索一下。我搜到一个图片应该可以很好解释你引物设计的问题，一般是利用一端颈环结构的引物和另一端序列特异性的引物，使用染料法或者探针法进行检测，但这个是用在qRT-PCR上的，还有一些其他可用的策略到达对miRNA定量和检测的目的，比如northern blot、或者做RT-PCR后克隆测序的方法。! e- ^; y/ c+ j$ I$ Z U6 `4 b
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作者: runsong 时间: 2011-7-10 22:26

可以看看当时我发的帖子
http://www.stemcell8.cn/thread-35845-1-1.html
现在我已设计了鼠与牛302a，302b，302c，302d，367，499a，34c的引物。

作者: kaxdd 时间: 2011-7-11 20:43

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, t8 u9 }" `+ W- M, y5 u( G! p
我只是想鉴定一下细胞内是否有某一miRNA的表达，不用定量，是不是只做RT-PCR就可以。

作者: runsong 时间: 2011-7-11 23:00

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可以，但要摸索循环数，我感觉同一miRNA在各个样品中的表达并没有质的区别，只有量的差别。

作者: wolf1978 时间: 2011-8-16 12:00

runsong 发表于 2011-7-11 23:00
7 V4 A& `) G3 ]/ T7 K回复 kaxdd 的帖子
" z' f. N5 k( k: ^( C) }) n- b
可以，但要摸索循环数，我感觉同一miRNA在各个样品中的表达并没有质的区别，只有量的差 ...

! m% h: L- E7 J% O; u1 }' X2 n) C* A
同意，以RT-PCR的敏感性，含量很低都能够扩增出来的。因此对自己关心的体系最好有个参照，以达到相对定量判断的目的！

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