人脂肪干细胞培养

llhxq09

我取人大网膜13ml，0.1%Ⅰ型胶原酶在培养箱内消化2:30h,之后过滤，1500r离心，接种于25cm2的瓶子，10%FBS/低糖DMEM（F-12也用过）培养，但是贴壁细胞很少，养不起来。有人知道怎么回事吗？以前用癌症患者大网膜，取40ml可以养出来，不知道是不是样本量太少了？急！

meister

你的胶原酶可能有问题

meister

5ml脂肪足够分离脂肪干细胞的了。/ d- V3 V" l) n, P! Y2 }
消化要完全，时间，浓度要增加

都市青蛙

回复 llhxq09 的帖子! n- R" u( C( B( B

% S6 I! u% b" _人的需要量是比鼠的多些，但是一般10ml都能养的不错，消化的时间40min成糊状就好了，你是不是消化的太过，离心用1000g就可以了
1 Y% X# ?) F5 ?3 i) w种的密度可以先大点( N1 j& k5 e! s% s# F( Q

llhxq09

谢谢，我再试试吧，有的人说5ml皮下脂肪就能培养出，不知道是真的能吗？我现在标本也不好取，哎

dc1055

建议：
; k# W6 q, }( n1.样本量加大；
6 i& \" g% t7 ^/ C/ _; O* [5 l2.消化时间减少；
) }6 v7 O) ~8 v3.离心速度减小；
( A7 p8 ]/ m1 k  p4.血清量加大

yuangaoqian

是不是消化时间太长了呀？我们做鼠的最多消化1个小时。