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标题: 淋巴细胞分离液使用 [打印本页]

作者: 121qwq 时间: 2015-7-15 09:24 标题: 淋巴细胞分离液使用

请问你们淋巴细胞分离液都只吸云雾层吗？有没有中间层全回收的？影不影响后期培养？

作者: 没有名字HJ 时间: 2015-7-15 09:30

我们都是要吸上下1cm左右，不影响培养的

作者: aochongyu 时间: 2015-7-15 10:02

本帖最后由 aochongyu 于 2015-7-15 10:05 编辑
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主要还是吸取白膜层，白膜层厚的话肯定会吸取上下层一部分液体，下层液体吸取越多一般红细胞越多，但是不影响后期培养，红细胞会自己裂解

作者: cloudycity 时间: 2015-7-15 10:35

我们都是全收的，对培养没什么影响。其实对回收率也影响不大，主要还是血的质量～

作者: suoweiyiran0411 时间: 2015-7-15 10:52

在手法熟练的情况下，尽量只吸白膜层，有些人怕单个核细胞损失，就尽量多吸点白膜层上下两层的液体，当然，这样会有血小板和红细胞等杂质，CIK是悬浮生长，所以有点杂细胞影响也不是很大，但是如果是DC的话，就会有影响，DC是贴壁生长，如果杂细胞多，会占据培养瓶底部空间，不利于DC贴壁，所以还是尽量纯化单个核细胞，杂细胞越少，越利于细胞的培养

作者: colins 时间: 2015-7-15 10:58

我们吸取上下0.5厘米，虽然没什么影响，但是还是越少越好

作者: gondobar 时间: 2015-7-15 11:14

当然是只取白膜层，但是手法限制，所以会吸到其他分离液。如果上层吸的过多会导致血小板过多，下层可能导致血细胞吸入。血小板大部分会洗掉，其余2~3天消失。基本不影响培养。

作者: eeel 时间: 2015-7-15 11:14

白膜层内含有一定量的单个核细胞，做科研的话尽量只吸取白膜层，做临床可以上下层多吸，保证病人细胞能够尽可能的多回收。对后期培养基本没什么影响。

作者: teahouse0802 时间: 2015-7-15 18:00

1.尽量不要多吸白膜层上下的液体，尤其不要吸太多的细胞分离液，因为细胞分离液的密度本身就比单个核细胞略小，如果细胞分离液的含量过多，不利于全部单个核细胞的洗脱。
2.如果要想保证单个核细胞全部分离出来，想要吸取白膜层上下的液体，请尽量多分几个离心管，吸取的液体与新加的生理盐水比例最好不要超过1：1.

作者: nkcell 时间: 2015-7-16 11:20

1.尽量多吸白膜层，如果吸了淋巴分离液过多的话，在离心的过程中会损失一部分细胞- C' u+ d3 ?( i9 ~3 k0 ^; ?
2.白膜层的细胞如果在淋巴分离液中比较多，就是离心的转数不合适，要尽快调整

作者: 121qwq 时间: 2015-7-16 14:15

回复 nkcell 的帖子

是使用多少g的离心力比较好呢？我们用的是600g

作者: nkcell 时间: 2015-7-17 11:43

淋巴分离液的品牌不同，离心力就不同，国产的一般400G就可以了，进口的最少500G

作者: 老姜 时间: 2015-7-21 15:37

1 我们实验中遇到吸MNC层时吸得Ficoll层太多，加入生理盐水后离心，MNC离不下来，将这部分细胞又再分为两份，再补入生理盐水（实质是将Ficoll稀释）后细胞才离下来。所以，不主张多吸Ficoll层的细胞。# p6 d% T! _4 ^) b: T1 k
2 吸入Ficoll层过多的红细胞，若是进行培养，红细胞几天后即死亡，如果是培养要求换液还好，如果只是添液死亡红细胞的“废物”怎么处理？对细胞生长多少都会有些影响的。5 m1 M5 Z4 u! `9 E
3 淋巴细胞分离液中的泛影葡胺等成分对细胞的生长有影响，所以，一般经Ficoll分离的细胞后均要洗涤三遍。

作者: 121qwq 时间: 2015-7-21 16:10

回复老姜的帖子6 J7 l6 a d! C0 x0 X4 g

非常正确，因为Ficol液的密度是不一样的，所以必须稀释之后细胞才能离下来，吸过多是不行的，红细胞吸多了也很头痛，我不知道怎么处理好

作者: 老姜 时间: 2015-7-21 16:15

我们是750g

作者: 小刘 时间: 2015-7-21 20:37

多吸白膜层，上下在白膜层2厘米左右，不能吸的太少，到时细胞培养不起来很麻烦，如果吸的分离液层较多的话，用生理盐水多洗一次，为了确保期间，能多吸别少吸，尤其碰到分层不清晰的情况，多吸没坏处

作者: hrty2015 时间: 2015-7-22 14:22

尽量只吸白膜层，下层淋巴分离液吸得多，红细胞的数量会增加，影响培养计数

作者: ryy123 时间: 2015-7-23 09:31

回复 121qwq 的帖子

是的，只吸云雾层，其它吸多了会影响培养的

作者: ryy123 时间: 2015-7-23 09:33

回复 suoweiyiran0411 的帖子. V" }& o+ U) Y. ?

说的很好

作者: ryy123 时间: 2015-7-23 09:37

回复 suoweiyiran0411 的帖子0 L7 V, H0 w) h( m1 u# W- a( b+ h

在吸取白膜层时有没有遇到有红细胞悬浮其中的？是不是离心太过造成的红细胞破碎啊？

作者: chenguangyu 时间: 2015-7-23 16:27

回复 121qwq 的帖子0 G% z& E; Z# a* V- H$ ~
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理论上是只吸白膜层，但是很难不吸著其他的。只要不吸住红细胞，一般对细胞后期培养影响不大。

作者: cheeray 时间: 2015-7-24 14:59

尽量少吸一点，多加生理盐水洗涤就可以了。

作者: suoweiyiran0411 时间: 2015-7-30 16:32

回复 ryy123 的帖子1 c* A6 ]" I8 c& \4 k
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是说明显看到有红色的东西了？有时候会有的，说明红细胞杂质太多，加分离液或者离心的时候可能没操作好，不过想要减少杂质，可以再用分离液分一次，就是成本高了点

作者: 免疫与细胞 时间: 2015-8-3 16:17

不同作业员根据操作熟练程度和手法差异可能造成回收率的差异，为了统一并排除个人手法作业造成的差异，我们会要求在收集白膜层时，白膜层上下2层都要吸取一些（一般是1/3），收集后加生理盐水稀释再离心，对培养没有影响。

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