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标题: 细胞培养出现絮状物 [打印本页]

作者: Anne_Yu 时间: 2015-9-17 15:25 标题: 细胞培养出现絮状物

本帖最后由 Anne_Yu 于 2015-9-17 15:43 编辑 ) @" d6 z# k- K- n7 E; @

我们做CIK培养，有些是采一回二的，然后在回完第一次，进行第二次培养的前几天会出现像这样的絮状物，据说是死细胞？这一份细胞絮状物特别多，但是在继续培养一段时间后，这些絮状物又会消失了。请问一下大家培养的时候会不会这样，这些絮状的东西是什么，后面又为什么会消失？

作者: Ivan0108 时间: 2015-9-17 16:57

确实是细胞大量死亡后的以前我们实验室有同事培养的时候会出现这种问题，但我自己一次都没有。所以从个人操作加液时间还要经常把培养袋抖一下混匀吧。 . P' G6 L- p) _2 s4 T4 o

作者: cneagle66 时间: 2015-9-17 17:41

可能是血清中的蛋白或者死亡细胞造成的，如果不影响细胞生长，可以不用管它。

作者: caustic 时间: 2015-9-17 17:46

不用担心，这是未完全分离的粒细胞在培养基中死亡造成的，不是你需要的淋巴细胞死亡引起的，所以不用担心。

作者: anzhida0823 时间: 2015-9-17 20:04

只要细胞能长起来就可以，没有太大影响。我们在培养脐血来源CIK时候也遇到过这种情况，曾经一批次十几株细胞都这样，也曾经使用相同血浆，个别细胞株会结絮，绝大部分都没有事情，所以个人认为这与培养血浆（血清）和细胞株都有关系，血浆（血清）中存在某种物质会使得细胞产生反应，不同细胞对这种物质的耐受浓度不同，造成结絮反应不同。以上属于个人见解，无实验数据支持，乃是凭个人经验推测，望高手不吝言辞赐教，感谢！感谢！

作者: 312473313 时间: 2015-12-19 14:14

我在培养CIK过程中也遇到了一些看着透明的絮状物，显微镜下看里面像是很多细胞就没管正常操作了，后来慢慢减少了但是这份细胞长势却不好，养了十多天了还不如别人7天增殖的多，求高手指导，感谢！！

作者: 细胞海洋 时间: 2015-12-21 13:10

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作者: Anne_Yu 时间: 2015-12-21 14:27

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你是培养几天出现这种情况的？我们一般是在培养后期，尤其是第二次回输的时候这种情况比较严重，不过感觉细胞的长势没有受到太大的影响。

作者: 312473313 时间: 2015-12-21 15:45

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第3天就发现了，细菌真菌内毒素支原体检测都没异常就没在意了，到后面长势明显差了很多

作者: 海南小石 时间: 2015-12-21 16:14

应该是死细胞。

采一回二的细胞和采一回一相比，本来就要难培养一些，细胞容易死亡。在留瓶培养的时候可能还不明显，但是用培养袋的培养效果不如培养瓶，转袋之后就有一些细胞会死亡。

作者: momoenn 时间: 2015-12-22 18:05

可以考虑几个方面：. L+ M7 T; k" J/ s6 D7 m
1.分离出单个核细胞干净吗？杂细胞多吗？如果红细胞和粒细胞等杂细胞较多，在培养的过程中，这些细胞会死亡裂解，产生一些粘性物质粘附一些瓶里的细胞，形成絮状物；* Z9 P7 Y* O& w. K
2.看分离出的单个核细胞活率和活性，如果状态不好，照样会和第一条一样；! [6 v \4 _/ _" ~ ^5 j: M
随着培养时间的增加，新鲜培养基慢慢加入，CIK细胞增殖的越来越多，前期死亡的细胞造成的不良影响越来越小，自然就消失了。

作者: a276038921 时间: 2016-1-18 13:04

这个东西有点像是，血浆中的不溶性蛋白在培养基中析出之后细胞粘附在表面上就容易出现这东西，你下回可以观察一下血浆灭活后的絮状物和你现在出来的这东西镜下观察很相识的- E. G% F( x @: R" k" f& ?

作者: lm573713920 时间: 2016-1-19 11:21

是细胞大量死亡才会这样，我们实验室有过这种问题。如果担心细胞污染的话，做一个快检内毒素，以防万一。

作者: Anne_Yu 时间: 2016-1-21 13:38

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嗯嗯，检测过了，细胞没有污染。

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