免疫荧光染色步骤 越详细越好

1195963542

免疫荧光染色步骤的文章或视频     越详细越好 谢谢

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子. f' B) e% {8 c' d/ m0 W( H
8 I" u& a7 l% J+ C% y# N" D7 w
板上细胞长到30-50%就可以做荧光了，如果长得太多，拍出的照片也不好看；你可以消化下来重新接种；请问IF是什么，没接触过，请赐教。

倒腾细胞

回复 jenny114402 的帖子
3 G  ?6 J- V0 G# x0 m
$ ^1 t: A) f8 D我得先用六孔板做transwell间接共培养24h  之后打算接着就用六孔板做IF  不过貌似细胞数量就很多了。。。。。难道要24h再消下来重新计数接种到24孔板吗？  

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子2 f& a1 J$ b4 }5 `6 z3 |. l

% D5 V+ b6 N4 f( z我说的是5*103是24孔板的细胞量，我们一直都用24孔板做免疫荧光，检测mark有点多

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子% Q0 V' ~9 _9 _  b

2 }3 @& F! W! W$ M" A' E6 {4 g( T  B! x细胞爬片就是那个玻片是包被过的，有强吸附能力；说白了就是细胞不易洗掉。

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子4 L9 |! l# ?# X2 o1 N; {
5 \+ W0 w! Z7 ]( e! ]
我做的是人的MSC，细胞量是5*103， 第二天做的免疫荧光

倒腾细胞

回复 jenny114402 的帖子4 n) `0 T. V& |$ b, v7 M

% _! `# Q, D& b8 W. _3 C! C请教前辈 细胞量有没有讲究  现在在六孔板培养大鼠MSC 过几天想做免疫荧光看细胞fibronectin和iNOS的表达  第一次做没有任何经验！细胞爬片又是有什么用处。

1195963542

回复 moluxingke 的帖子
4 F( R1 q/ j% z4 S& Y
! S: }: A9 R+ D9 O3 _OK  
2 x* G# ^! D7 r0 m, d/ r

jenny114402

表面蛋白省去TritonX-100打孔

jenny114402

免疫荧光分为胞内核蛋白和表面蛋白7 O3 b* a6 p% n& L# b
核内蛋白染色步骤：' X1 \/ P& E0 h" W5 c
1.在24孔板内接种细胞，1ml培养基培养，待细胞长到30%-50%染色+ I- u* I$ Z! L% d
2.吸弃培养基，PBS洗两次
- {1 {4 x# E! C3 w3.4%的多聚甲醛固定25min& B; D9 `- ?: h# A3 r
4.PBS洗3遍* j7 m* r. A7 P7 \' V! F
5.250ul 0.25%TritonX-100，室温20min
0 F2 R; F* E3 p4 m6 ]; \6.PBS洗3遍
, k6 D4 W+ \/ B; b3 @/ g/ H7.200ul 10%的山羊血清，室温封闭30min
+ Q& X# _) o% c- X8.弃封闭液，加一抗，避光4度过夜  o1 q! S% U" c1 H- H3 [  J
9.PBS洗3遍4 Q1 ~5 v1 l0 y5 \& ]
10.加二抗，避光室温2h
2 G+ i6 [# z6 \  j, k( W0 x/ [11.加稀释好的PI/DAPI，避光室温20min
" o  s% a2 h0 ~8 _% l$ F12.PBS洗3遍，镜检。