免疫荧光染色步骤 越详细越好

1195963542

免疫荧光染色步骤的文章或视频     越详细越好 谢谢

moluxingke

看文章看视频，真不如在自己详细了解相关原理之后，动手做上一遍。然后再把遇到的有关问题请教其他人。

jenny114402

免疫荧光分为胞内核蛋白和表面蛋白
" [1 P; u) u4 n核内蛋白染色步骤：) c1 N8 P  G3 V! }& M
1.在24孔板内接种细胞，1ml培养基培养，待细胞长到30%-50%染色
" k8 s- b7 m6 m/ T2.吸弃培养基，PBS洗两次
/ O/ A8 q: e. [- N7 G' D3.4%的多聚甲醛固定25min
& @- @+ Y$ q! [4.PBS洗3遍
& _2 J( o' E& O( H5.250ul 0.25%TritonX-100，室温20min
1 X: k0 O* ?: v/ {! ?; F6.PBS洗3遍, p! b, F0 t) A/ b) {6 y  J
7.200ul 10%的山羊血清，室温封闭30min
/ A' g$ ~# c3 N; n+ L! Z8.弃封闭液，加一抗，避光4度过夜
0 B' }, k' G  E2 h. ?9.PBS洗3遍' c$ w- ~& N) J- ~
10.加二抗，避光室温2h" c, w4 }+ P7 h- v4 A/ i3 B$ `
11.加稀释好的PI/DAPI，避光室温20min' E3 T* f. K% I% O! h; k
12.PBS洗3遍，镜检。

jenny114402

表面蛋白省去TritonX-100打孔

1195963542

回复 moluxingke 的帖子3 w0 e: E: |4 ?) {
; G" h- ?+ L! }) W( V8 \
OK  ) n; W. s+ D! F9 D8 M

倒腾细胞

回复 jenny114402 的帖子) ~1 Q, L8 L* M8 Q

! q% ?% w* G, c' @' E请教前辈 细胞量有没有讲究  现在在六孔板培养大鼠MSC 过几天想做免疫荧光看细胞fibronectin和iNOS的表达  第一次做没有任何经验！细胞爬片又是有什么用处。

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子
& Z* l* S: _2 {
& \* k) ~8 A0 p& X& Q! ~! ^- Q$ \我做的是人的MSC，细胞量是5*103， 第二天做的免疫荧光

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子
2 E$ t7 d# t( t9 F3 z; b! W
& Z0 n) X( b# S/ y细胞爬片就是那个玻片是包被过的，有强吸附能力；说白了就是细胞不易洗掉。

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子0 ?7 u& h+ T5 _- S6 m

/ P/ }# l+ F5 O% H; ]我说的是5*103是24孔板的细胞量，我们一直都用24孔板做免疫荧光，检测mark有点多

倒腾细胞

回复 jenny114402 的帖子) Y' s9 R" |! n6 D

7 }; W/ K$ k9 q5 k6 \我得先用六孔板做transwell间接共培养24h  之后打算接着就用六孔板做IF  不过貌似细胞数量就很多了。。。。。难道要24h再消下来重新计数接种到24孔板吗？