免疫荧光染色步骤 越详细越好

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免疫荧光染色步骤的文章或视频     越详细越好 谢谢

moluxingke

看文章看视频，真不如在自己详细了解相关原理之后，动手做上一遍。然后再把遇到的有关问题请教其他人。

jenny114402

免疫荧光分为胞内核蛋白和表面蛋白
& c1 m; M! H& j7 u核内蛋白染色步骤：
1 }/ ~. t% P- @+ [0 L9 F, m1.在24孔板内接种细胞，1ml培养基培养，待细胞长到30%-50%染色$ L2 ]7 q$ i& N$ k
2.吸弃培养基，PBS洗两次
8 M, |. q9 ?# I9 Z6 N  ]: G" `5 c3.4%的多聚甲醛固定25min
7 @9 g9 k& z  i: f3 E# F4.PBS洗3遍% t! O/ I% B: o6 @5 }, w
5.250ul 0.25%TritonX-100，室温20min% r: Q: O' [7 g' s& f
6.PBS洗3遍
, B4 [' I: h+ t7.200ul 10%的山羊血清，室温封闭30min
8 b: t  f1 {5 E2 f8.弃封闭液，加一抗，避光4度过夜4 ~/ H. c0 \  r6 q9 Y0 _
9.PBS洗3遍
9 ~/ u( B7 n8 h& _10.加二抗，避光室温2h
5 `: `# m) i* Y* L6 \$ @11.加稀释好的PI/DAPI，避光室温20min
% h0 h6 K/ H5 f) `: a) B9 B% D12.PBS洗3遍，镜检。

jenny114402

表面蛋白省去TritonX-100打孔

1195963542

回复 moluxingke 的帖子( c/ B0 j* w, s9 z! r& z! M
! B9 Z% B* x. k
OK  
: G; [6 r& `4 X4 z+ U$ c% |0 [

倒腾细胞

回复 jenny114402 的帖子
: W" s! r& m: l( c" K& o3 Z; A( n: o/ ~! U
请教前辈 细胞量有没有讲究  现在在六孔板培养大鼠MSC 过几天想做免疫荧光看细胞fibronectin和iNOS的表达  第一次做没有任何经验！细胞爬片又是有什么用处。

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子4 p# O' N* V. q6 a% U
6 ]  D9 T6 g5 s5 H% I7 y
我做的是人的MSC，细胞量是5*103， 第二天做的免疫荧光

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子- c7 i/ R; E$ X" h+ H" o

: }2 G  w! ?  V2 k细胞爬片就是那个玻片是包被过的，有强吸附能力；说白了就是细胞不易洗掉。

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子# V! i" k8 }( q) b+ A
7 w( V: k% b1 C, E6 x
我说的是5*103是24孔板的细胞量，我们一直都用24孔板做免疫荧光，检测mark有点多

倒腾细胞

回复 jenny114402 的帖子  [) S+ n# @6 ~! q5 U
7 e# ?7 R% r3 J5 r1 t1 O. N+ s
我得先用六孔板做transwell间接共培养24h  之后打算接着就用六孔板做IF  不过貌似细胞数量就很多了。。。。。难道要24h再消下来重新计数接种到24孔板吗？