六孔板加胰酶量

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6孔板加胰酶的浓度和胰酶的量  推荐是多少呢  

breakutopia

有没有人遇到过干细胞被消化起来，但是没有办法吹散成单细胞还是一个很大克隆团的问题呢

吃呆猫

0.5ml 0.05%的胰酶（干细胞），肿瘤细胞 0.25% 0.25ml。加完后摇晃一下吸的剩一点再消化

晗晗

少加一点就行了,不用1ml,在37摄氏度条件下消化5分钟即可

UlissesJR

无论用什么类型培养器皿，加胰酶的量能够覆盖底部即可，多了也是浪费

sfnana

我们一般加1ml，0.25%胰酶（含0.04%EDTA，无钙镁）,消化2分钟左右，镜下观察细胞变圆，加等体积的培养液中止消化，用枪轻轻吹打细胞，收集离心，进行下一步。胰酶对细胞的伤害比较大，所以镜下观察，及时终止消化非常重要。

随时准备下线

回复 yinchong42 的帖子6 Z; J* `3 x0 v2 G

( @" y4 b! b5 h4 _7 B24孔板边缘效应严重，加入的胰酶不是平铺在孔底的，为了达到覆盖全部孔底，必须多加

晗晗

少于1ml，零点几毫升吧

蚂蚁上树

加入200-300ul就可以了，足以覆盖孔板底面，然后放到培养箱消化，快的话半分钟，慢的话3-5分钟，放到镜下观察，细胞变圆就可以终止消化，终止时用枪头吹打下，就可以了。

zmfang555

还得看你是什么细胞，如果是293，293T等贴壁不牢容易消化的细胞,6孔板0.25%EDTA每孔加250UL足已，一般3min就有针眼状出现，这时就可以准备血清终止消化了，如果消化的细胞继续传代，胰酶应尽量少加，覆盖孔底即可，如果用来做实验，稍微多加一点无所谓，但是应尽量减少消化时间，以免对细胞造成伤害。