从肿瘤组织中获取DC特异性抗原

baby00000003

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* F$ R- o3 n9 ~7 z& z0 O$ z
0 d9 l, A/ L4 S# M! c# y俺还没做过成块儿的组织提抗原的，也许可以酶消成单细胞？

baby00000003

回复 momoenn 的帖子0 Q$ E1 X# J5 M2 u
/ X/ O$ {/ f' H9 r5 u! `# c* t
可以像做western裂细胞那样，加蛋白酶抑制剂。不过这个提取抗原可能最后要求的细胞密度不那么大，也可以忽略那些个水解酶吧～

momoenn

回复 baby00000003 的帖子1 e( j2 Z% u) }6 A7 n9 E
0 b- L6 [( i9 k( z
或者，有没有更好的办法让俺学习一下

momoenn

回复 lgfffancy 的帖子, O, U  |3 k- Z$ t; N. v) Z

1 k3 b% C& D' E; k$ g昂，得到肿瘤细胞后再反复冻融得到肿瘤抗原

momoenn

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3 J/ W: q$ ~% U! \! C. f- Q
! b) Y" `) a( Y/ ?  l" {7 h8 t中间有一步关键的步骤，是水浴灭活，应该是灭活的酶的活性。如果直接磨碎反复冻融的话，是不是可能会把目的蛋白给消化了。

baby00000003

回复 momoenn 的帖子# w9 t0 Z6 k6 v+ y* v

7 ~, L4 X) p5 a4 k) P  z总之是要破碎细胞获得可溶蛋白呗～
$ z+ }" v6 l" p/ A7 V1 ]干脆就操作的时候小心点别污染，给它磨碎了直接反复冻融吧，最后离心的时候，大块和难容碎片也就离掉了
* W4 J! h7 y3 H; D3 KBCA测测蛋白浓度，调整一下初始的组织块大小，也就O了吧～

lgfffancy

目前看，你这种方法你是想获得肿瘤细胞吧

momoenn

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1 n; j7 q: a. d8 R  n
/ E7 R- C/ H/ W7 g  ^5 T研磨得到肿瘤细胞的单细胞悬液，再经42°和60°灭活。然后反复冻融得到肿瘤抗原。但是现在研磨后的液体看不到细胞形态。离心后颜色还特别红

momoenn

回复 shunho-cell 的帖子* \9 R8 t3 D) I/ M

, }- _) d' O3 }8 d, X/ d$ `9 ]; q9 W研磨后应该得到肿瘤细胞的单细胞悬液，现在显微镜下基本观察不到细胞形态。离心得到的沉淀为什么是红色的呢？

momoenn

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2 ~/ z# ?. Z: R
- H" I1 P, p; c我现在还没处理完，后续还应该进行反复冻融，然后离心取上清得到最后产物。只是感觉现在状态不太对。