从肿瘤组织中获取DC特异性抗原

momoenn

大虾们帮忙看看这是什么情况？
5 ]8 T" A+ Q# J2 O) Z: l' q6 q第一次做肿瘤抗原制备。前一天临床上采集肿瘤组织后在冰箱里放置，第二天才处理，中间在-20°冰箱放置了。操作：酒精消毒1-2min，经生理盐水清洗3遍，取中间部分剪碎后，放置在细胞筛中研磨，如下图/ m  y/ X& @" }5 G
平板里放了一些培养基。研磨后取平板里的液体显微镜下观察，并离心，分别得到以下结果。4 {8 T# x: z+ j" R
亲们给分析一下这是什么情况，谢谢啦！急问，在线等。

baby00000003

不太了解你这个处理方法是什么原理，可否详细解释下哩？

shunho-cell

貌似产物很少？

momoenn

回复 baby00000003 的帖子5 G# x" Q; K6 {% p
6 m0 k0 t- N' ^% i- D0 o6 _7 A
我现在还没处理完，后续还应该进行反复冻融，然后离心取上清得到最后产物。只是感觉现在状态不太对。

momoenn

回复 shunho-cell 的帖子3 ~: n8 l% z0 ^, ]3 q* Y
0 C& ^7 _- t0 A' {
研磨后应该得到肿瘤细胞的单细胞悬液，现在显微镜下基本观察不到细胞形态。离心得到的沉淀为什么是红色的呢？

momoenn

回复 baby00000003 的帖子9 V' z. j. `6 }0 ]  G

: k- V- h4 B" \+ `$ V- [9 Q$ I研磨得到肿瘤细胞的单细胞悬液，再经42°和60°灭活。然后反复冻融得到肿瘤抗原。但是现在研磨后的液体看不到细胞形态。离心后颜色还特别红

lgfffancy

目前看，你这种方法你是想获得肿瘤细胞吧

baby00000003

回复 momoenn 的帖子: E6 R: f7 T( a& a/ y# |# o3 E, T
2 r$ B" W' [' y- J, O$ Z" k
总之是要破碎细胞获得可溶蛋白呗～7 v" m9 {' g* A2 H0 \7 b: O. w, ?: Z
干脆就操作的时候小心点别污染，给它磨碎了直接反复冻融吧，最后离心的时候，大块和难容碎片也就离掉了9 Q9 y: f( w% {
BCA测测蛋白浓度，调整一下初始的组织块大小，也就O了吧～

momoenn

回复 baby00000003 的帖子4 B  [) v# _) \: A6 f: c0 f
. a  e' [- e8 B8 I7 ]- ~
中间有一步关键的步骤，是水浴灭活，应该是灭活的酶的活性。如果直接磨碎反复冻融的话，是不是可能会把目的蛋白给消化了。

momoenn

回复 lgfffancy 的帖子! ^. u) p* Y" S1 x5 }
9 |% o& u" U0 U! q& w7 K
昂，得到肿瘤细胞后再反复冻融得到肿瘤抗原