终止胰酶消化的培养基量的定位

1195963542

MSC加入胰酶消化一定时间后，需要进行终止消化，那么终止消化的培养基的量是不是≥胰酶的量即可，可以＜胰酶量么？ 这个量是根据什么定的   

sfnana

一般我们要求是等比例中止消化，但是在实际的操作过程中，我们一般都会多加一些培养液来中止消化，原因如下：
. p2 Q/ a" E) i1.血清可以更充分的与酶结合，彻底中止酶的消化作用。在操作的时候，因为一般都是多瓶操作，所以后面几瓶等待的时间可能会较长，如果按照1:1中止消化，有可能中止不彻底，胰酶继续作用，毕竟胰酶对细胞的伤害比较大，所以可能导致同批次的细胞有的传代后细胞状态好，有的不好。
4 i* C, x3 ~* Y  P! `" m- w2.对于贴壁细胞来说需要吹打，如果液体体积太小，吹打过程中容易产生大量的气泡，这些气泡的产生对细胞的伤害也比较大。

bubble_w

回复 1195963542 的帖子- E- b$ M/ W: V

# Y# f3 N1 A4 X4 R" x2 ?) i, Q; ^终止胰酶消化的量是一定要大于胰酶使用的量。有人使用品牌生产的胰酶抑制剂作为终止消化液，我们实验室一般使用培养液作为终止消化液。至于终止消化的液体量要看实验室的经济情况，我们一般采取至少两倍消化液的体积的量去终止消化，这样做的好处是终止消化比较彻底，加入的液体量大对消化为悬浮状态的细胞有保护和缓冲的作用。当然，如果你们实验室经费充足，建议3-4倍胰酶量的培养液终止消化，这样对大量贴壁细胞的彻底消化也是有好处的。

abc2613130

原则上都是等量添加，但是，我们操作的时候就基本上都是两倍量

风倾颜

我们实验室一般情况下是1:1的加，不过我觉得还是多加一点的好，防止过消化

anning111

实话告诉你吧，真正能中止胰酶消作用的是FBS，而不是基础培养基。
3 P9 o$ s5 \6 F. n" r$ e5 b1 s( b$ ]3 y
如果是Tryple,只能采取稀释的方式才能终止消化。

hitmanc

用之前培养液上清，添加量至少比胰酶多

枫之叶影

无血清培养基培养的细胞消化，应该是降低胰酶浓度，从而是胰酶的消化能力减弱或者消失，这样看至少是1:1的终止液终止消化

蚂蚁上树

是血清成分终止了胰酶的作用，所以，个人认为不应该只看终止培养基的体积，而是培养基中的血清的含量，血清浓度大的可以稍加一点即可

veda327

第一：如果是需要进行临床试验的MSC，体系内最好不要混入动物源性的血清，所以准备这个一枚的终止液需要慎重。
2 `3 ?/ g) {3 ?6 ?4 k第二：不知道大家都是怎么操作的，难道是胰酶消化之后就直接在消化液中添加终止液么？我一般都是加入一定量的胰酶消化液消化一段时间后去除消化液，让残留的消化液继续消化几分钟，见到细胞开始（成片）脱落之后加入生长培养基，这样子就不需要考虑什么终止液的用量了，体系内实际残留的胰酶的量非常少了！