G418 筛选时工作浓度如何确定，谢谢！

缥飘实验员

现在电转 H1细胞后，做 G418筛选，G418的工作浓度如何确定，在24孔板里接种多少个细胞合适，在0.1-1mg 之间筛选 10-14天细胞全部死亡的实验组，有没有相关文章可借阅，万分感谢

yeshch

我们用的是200-250μg/ml，两天就欧克了

缥飘实验员

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4 z& O- h! v( d0 T我的25ug 组，现在7天了，50ug 组，96h 挂，75ug 组，72h 挂，100-200ug 组，48h 挂，300，400，500 24h  挂的差不多了，你们那个挑出来的阳性率怎么样。我们老大只要14天，或者大于14天的抗性克隆，求 help

yeshch

按你这样说，50ug都挂了，说明很可能不是药杀浓度导致细胞死亡，有可能你的电转有问题，而且本来电转对细胞的损伤都比较大（我们一般用病毒感染）；即使不是电转对细胞伤害造成细胞死亡，也可能是电转效率低，本来就没几个阳性克隆。建议电转完给细胞多一些恢复时间然后再药杀。祝实验顺利！

缥飘实验员

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我现在还在做药物工作浓度的筛选实验呢，就是正常培养的细胞加药筛选，得到工作浓度，电转后再加药物进行筛选。现在 50ug 组96-120h 全部死亡，25ug 组，cell confluence 50%， 加药 216h-240h 死亡；cell confluence 30% 加药 312h 还未死亡，细胞越来越少，但是杀死很缓慢，估计要筛选3周。现在还在继续加药培养中。正在进行30，35，40，45ug 组的梯度实验，希望能找到14天能杀死细胞的实验组。第一次做，完全没有经验，还请分享学习。

缥飘实验员

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我现在还在做药物工作浓度的筛选实验呢，就是正常培养的细胞加药筛选，得到工作浓度，电转后再加药物进行筛选。现在 50ug 组96-120h 全部死亡，25ug 组，cell confluence 50%， 加药 216h-240h 死亡；cell confluence 30% 加药 312h 还未死亡，细胞越来越少，但是杀死很缓慢，估计要筛选3周。现在还在继续加药培养中。正在进行30，35，40，45ug 组的梯度实验，希望能找到14天能杀死细胞的实验组。第一次做，完全没有经验，还请分享学习。