CAR-T细胞转染请教

六弦七品

MOI低了转不进去，高了细胞又挂，大神们是如何解决这个问题的？

拉二胡的拉尔夫

1.逆转录病毒:优点：转导效率高。缺点：有引起插入致瘤的风险，不能感染非分裂细胞，病毒滴度低
9 d# m5 H2 K9 L# B- A! I0 V6 `4 b2.慢病毒：优点：转导效率高，可转染分裂细胞和非分裂细胞，长期稳定的基因表达。缺点：成本高: `4 k  a& q* {/ ?3 a# t
3. RNA电穿孔：缺点：瞬时表达（<1周），需反复注射

riverdtang

慢病毒，超离浓缩到8次方以上滴度，加polybrene，T细胞分离24-28h转，有50%转染率

ET生物人

回复 riverdtang 的帖子) V5 s4 [$ |) |6 A7 X  @$ n  k& n

  ?2 S6 p$ s* ^7 ^- YT细胞分离24-28h转   请问 这是什么意思？？

riverdtang

回复 ET生物人 的帖子! d1 K9 a' }/ X7 i
7 B; k  b1 e' p0 [% b
分离后48小时转，效率高些

ET生物人

回复 riverdtang 的帖子0 c9 U2 W( }; r0 X" T5 Q# w
# k: [! B/ b% o# ]) N
你是用什么培养基的？？我们用了好多方法，发现转染效率很不稳定 不知道是哪里出问题

riverdtang

回复 ET生物人 的帖子$ Y1 }) D- x" b7 u5 P1 s$ N5 n5 ^& s

# X. R4 \. k; atakara，美天旎，lonza等养T细胞的培养基都可以，感觉培养基对转染率并没有太大影响

biluolinyu

转染不加血浆和抗生素算不算？

ET生物人

回复 riverdtang 的帖子3 M" w7 i. Z" Z  |

  N3 @4 i# A9 \$ M4 Z' U5 N那你觉得感染率是跟什么有影响？

lgfffancy

回复 biluolinyu 的帖子& f& z: p+ Z" }; @! s
+ M8 k% H: r2 i' }' L+ u
transfection的时候最好不要加抗生素，提高转染效率