CAR-T细胞转染请教

六弦七品

MOI低了转不进去，高了细胞又挂，大神们是如何解决这个问题的？

拉二胡的拉尔夫

1.逆转录病毒:优点：转导效率高。缺点：有引起插入致瘤的风险，不能感染非分裂细胞，病毒滴度低7 S( y% j6 F; Z' B
2.慢病毒：优点：转导效率高，可转染分裂细胞和非分裂细胞，长期稳定的基因表达。缺点：成本高
4 {; b% H7 S0 T3. RNA电穿孔：缺点：瞬时表达（<1周），需反复注射

riverdtang

慢病毒，超离浓缩到8次方以上滴度，加polybrene，T细胞分离24-28h转，有50%转染率

ET生物人

回复 riverdtang 的帖子' T& f0 N) e: ]6 c
( Q/ v' t. [! Q! k# }) i
T细胞分离24-28h转   请问 这是什么意思？？

riverdtang

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, H4 Z- A, R6 p/ r- a2 y' a# S! x' U1 \8 X4 X  r3 A: I
分离后48小时转，效率高些

ET生物人

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& m* L  G/ c( x* h3 e2 O/ z8 S1 `2 a. C
你是用什么培养基的？？我们用了好多方法，发现转染效率很不稳定 不知道是哪里出问题

riverdtang

回复 ET生物人 的帖子$ ^7 W! n& x" Z2 ^1 a, _2 B6 S3 D
4 ^: n" P- b3 n5 @" @* `
takara，美天旎，lonza等养T细胞的培养基都可以，感觉培养基对转染率并没有太大影响

biluolinyu

转染不加血浆和抗生素算不算？

ET生物人

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$ g. u) n/ c2 M  P/ {( ^7 Y" J0 J$ i2 h* H! i. }. b
那你觉得感染率是跟什么有影响？

lgfffancy

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transfection的时候最好不要加抗生素，提高转染效率