CAR-T细胞转染请教

六弦七品

MOI低了转不进去，高了细胞又挂，大神们是如何解决这个问题的？

拉二胡的拉尔夫

1.逆转录病毒:优点：转导效率高。缺点：有引起插入致瘤的风险，不能感染非分裂细胞，病毒滴度低& H( Z! `2 a& H3 H; n$ h7 `0 e
2.慢病毒：优点：转导效率高，可转染分裂细胞和非分裂细胞，长期稳定的基因表达。缺点：成本高
/ t' a, P! ~) J# O5 @' v4 h$ U% }3. RNA电穿孔：缺点：瞬时表达（<1周），需反复注射

riverdtang

慢病毒，超离浓缩到8次方以上滴度，加polybrene，T细胞分离24-28h转，有50%转染率

ET生物人

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2 G3 C. z+ z$ \+ p6 ^1 N! a* @8 B% e) h7 |4 _+ d2 G$ M' r
T细胞分离24-28h转   请问 这是什么意思？？

riverdtang

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% @( w4 Y* t0 k! e/ H1 Y/ h7 \3 g5 S5 E
分离后48小时转，效率高些

ET生物人

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0 w, B. |8 i% D2 @
( v6 N0 T) }8 ^# r1 l3 P, l! H  o你是用什么培养基的？？我们用了好多方法，发现转染效率很不稳定 不知道是哪里出问题

riverdtang

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: Q0 m& G" t  }8 T' s/ G4 P0 C" ~  {, j5 C7 `7 p2 L: c
takara，美天旎，lonza等养T细胞的培养基都可以，感觉培养基对转染率并没有太大影响

biluolinyu

转染不加血浆和抗生素算不算？

ET生物人

回复 riverdtang 的帖子9 X) K" e3 D1 v5 p
) `9 c1 U+ N, |1 x+ W
那你觉得感染率是跟什么有影响？

lgfffancy

回复 biluolinyu 的帖子' Z8 ]+ E* K! f& f

- ~0 @* f2 P# f3 e  g) }transfection的时候最好不要加抗生素，提高转染效率