CAR-T细胞转染请教

六弦七品

MOI低了转不进去，高了细胞又挂，大神们是如何解决这个问题的？

拉二胡的拉尔夫

1.逆转录病毒:优点：转导效率高。缺点：有引起插入致瘤的风险，不能感染非分裂细胞，病毒滴度低
( \, Q+ `( `; i) L' f$ c' K2.慢病毒：优点：转导效率高，可转染分裂细胞和非分裂细胞，长期稳定的基因表达。缺点：成本高
0 @: U' J, W) O0 D3. RNA电穿孔：缺点：瞬时表达（<1周），需反复注射

riverdtang

慢病毒，超离浓缩到8次方以上滴度，加polybrene，T细胞分离24-28h转，有50%转染率

ET生物人

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: l, P# U( o( R  O0 y1 s) T- s; T! T8 P1 e% c9 @2 e  Z) V
T细胞分离24-28h转   请问 这是什么意思？？

riverdtang

回复 ET生物人 的帖子4 b6 {& j  C4 J) f$ R7 ?

/ D0 {) u5 K3 H6 a分离后48小时转，效率高些

ET生物人

回复 riverdtang 的帖子5 Q0 Q5 D% u' P7 {, g" n
/ v# V: r3 _0 {1 U7 O4 M
你是用什么培养基的？？我们用了好多方法，发现转染效率很不稳定 不知道是哪里出问题

riverdtang

回复 ET生物人 的帖子# z" a7 x$ x$ d! k% z  x& c
+ E& ~. {  a! N5 ^: D# o2 H2 @
takara，美天旎，lonza等养T细胞的培养基都可以，感觉培养基对转染率并没有太大影响

biluolinyu

转染不加血浆和抗生素算不算？

ET生物人

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7 Y' ]* W# I9 d" |( h' `: j. {2 T2 ~7 v2 x5 r& J4 P
那你觉得感染率是跟什么有影响？

lgfffancy

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% K. R$ r: ]" ~* r9 i5 U+ J; ^% q: h- z! }0 C  ^3 `4 {" B
transfection的时候最好不要加抗生素，提高转染效率