求助：自体血浆的处理

gengtongyu521

用枸橼酸钠抗凝剂采血袋采血后，处理血浆，56度灭活30min，但后期培养中，添加自体血浆，CIK细胞悬液中经常会出现絮状物，细胞活性受很大影响。我有时会重悬细胞后，过滤一下细胞悬液，去掉絮状物，再重新培养，但是细胞增殖不好，请问大家有没有遇到过？如何解决？谢啦，谢啦！

994545

血浆用在前几天就够培养增殖了   后面血浆在4℃保存的质量不能保证。    如果是前期的絮状物的话：漂浮的可能是血液里的脂类，  还有就是粒细胞分泌出来的物质及培养适应期死亡的细胞（这个可以在显微镜里看出来，对比前几天的细胞团状态）  后期的话只能往污染这方面想了（表示没遇到过）。

免疫与细胞

血浆每次使用之前最好离心一下
, @0 U, }  ^. |0 n2 K+ ]; L! k$ a! i0 G, u
因为在低温下即血浆存放于冰箱的过程中，血浆内会析出一些物质，导致絮状物出现。

why77yhw

另外还要补充，添加点人血白蛋白进去，能一定程度缓解，但因人而异，很具有特异性！试试看吧

why77yhw

1.血浆不是必须添加的，只是提供营养成分，但如果培养基中的营养成分能够满足生长需要，可以不添加。
) S( n- w6 C0 v0 i" }2.如果发现添加血浆后，细胞生长效果不好，应停止血浆的使用。
. f1 C5 e# }' Z) @" l- c3.血浆灭火后需要离心去除补体，一遍不行就再离一遍试试看，应该还会有补体被离心出来。
- F. l8 N  C' J$ Y$ M  d4.供你参考：1.如果细胞体积不大，收集细胞，重新接种。
# u4 Y  n; x( P8 i# F6 e5 O                     2.接种前，吹打细胞，尽量吹散，吹不散也不强求哦~3 @% W0 |: ~% ^% L4 K
                     3.对细胞进行活率检测
6 o. }1 m/ o( m2 k                     4.调整到合适密度重新接种！
+ o6 z' ^( o" ~( ~                     5.如果细胞活力低，检测下内毒素和支原体，排除掉其他因素。

mengnancy

56℃灭活后4000转离心，取上清，添加自体血清的浓度过高了吗，一般0.5%-1%；另外细胞接种的浓度是否过大，红细胞是否较多，细胞增殖太快，营养不足引起细胞凋亡等，排除找下原因。

seergene

回复 gengtongyu521 的帖子. }' z' e/ T  K. m: c
$ D3 u' }# v+ t
AIM-V也用过，跟T551一样也会出现絮状物或培养基变成凝胶的时候。有人说是培养基或血浆中纤维蛋白原导致。我试过不加自体血浆培养过，同样会出现这样的问题。至于培养基中有没有纤维蛋白原，就不太了解了。还有人说是死细胞导致，个人认为可能性不大。这是版主推荐的以前讨论的帖子。
' R2 `- u) z6 ]. A1 vhttp://www.stemcell8.cn/thread-69130-1-1.html:

拉二胡的拉尔夫

这里分享一下我的实验经验：
0 H; B) r2 B$ q, S1.絮状物有可能是未去除的纤维蛋白原造成的，可以通过增加一点点Ca离子拮抗去除，或者通过反复冻融离心去除。# C( O$ M! N0 @7 A
2.枸橼酸处理的血清刺激增殖的能力比肝素查很多，所以肝素首选，枸橼酸次之，EDTA在次之。
( \( c6 W+ ?9 b) O% K9 X& q3.AIMV培养基是医用临床级别的，但是他前期刺激细胞增殖的能力很一般，所以更需要高品质的血清辅助。
( n9 F' q% Y: f6 F0 r: s" H希望能帮到你。

gengtongyu521

回复 seergene 的帖子% R/ V7 s0 J1 m5 h! s
) j+ u3 A7 v7 c
谢啦  我用的是AIM-V培养基。

gengtongyu521

回复 seergene 的帖子7 i. T* w( v  d  _0 ?$ Z% x9 f1 U
- X8 m4 j* M9 j0 f0 X' u
我用的是AIM-V培养基