大鼠脂肪间充质干细胞提取

wzm123hzy

各位老师师兄师姐们：
2 t% p/ {$ J1 c* O% U& ~' S; S& W我前两天做大鼠脂肪干细胞的原代提取，在提取2天后，都没有看到脂肪干细胞的，只有油滴。我用的是sigma 0.1%的1型胶原酶（30mg加入30mlPBS),剪碎后的脂肪含量大约3g，我加了6ml的胶原酶，放在恒温震荡器中120r，消化了60min，之后1500r 离心10min，去除上清，DMEM-F/12重悬沉淀，但是从培养开始就只看到油滴，一直没有看到贴壁的细胞。- Z: B' t2 ~# a
是由于消化的时间太长吗？同时我感觉我的大鼠鼠龄有点长，还是在过程中我有什么错误，希望老师，师兄师姐们不吝赐教。谢谢

Dunncao

你好。脂肪干的话，对材料有一些要求，尽量找那些颜色较深的脂肪组织。腿部、下腹部的会比一般皮下的要好。组织剪得够碎的话，消化时间尽量短一些，30min就足够了。
4 e2 v5 P+ F" }/ C9 m( K细胞首次贴壁时间会比较长，静置3天以上再观察。

蛋蛋心月

1.去上清的时候，多留一点也没关系，5ML左右，省得把细胞沉淀都倒出去。% ?. T- ~- u1 Z* o! O
2.如脂肪样本比较少，接种的时候，要用小尺寸的培养皿。: U) K4 r! P" G2 ?( `
3.接种后，前期不要动它，一般接种后2天换液。

wzm123hzy

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) X" V  O: M+ S& Q* T好的，谢谢您的建议

wzm123hzy

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好的，谢谢您的建议