大鼠脂肪间充质干细胞提取

wzm123hzy

各位老师师兄师姐们：& v' @0 L/ n7 Q" f8 K9 P% T5 {
我前两天做大鼠脂肪干细胞的原代提取，在提取2天后，都没有看到脂肪干细胞的，只有油滴。我用的是sigma 0.1%的1型胶原酶（30mg加入30mlPBS),剪碎后的脂肪含量大约3g，我加了6ml的胶原酶，放在恒温震荡器中120r，消化了60min，之后1500r 离心10min，去除上清，DMEM-F/12重悬沉淀，但是从培养开始就只看到油滴，一直没有看到贴壁的细胞。; p: d; T% B( m5 D( L3 H2 a" Z9 t
是由于消化的时间太长吗？同时我感觉我的大鼠鼠龄有点长，还是在过程中我有什么错误，希望老师，师兄师姐们不吝赐教。谢谢

Dunncao

你好。脂肪干的话，对材料有一些要求，尽量找那些颜色较深的脂肪组织。腿部、下腹部的会比一般皮下的要好。组织剪得够碎的话，消化时间尽量短一些，30min就足够了。2 s; |3 o: C, B( r
细胞首次贴壁时间会比较长，静置3天以上再观察。

蛋蛋心月

1.去上清的时候，多留一点也没关系，5ML左右，省得把细胞沉淀都倒出去。
/ x1 y- C0 f$ I2.如脂肪样本比较少，接种的时候，要用小尺寸的培养皿。
- \/ c1 y* ^# C1 w7 b; k' K3.接种后，前期不要动它，一般接种后2天换液。

wzm123hzy

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好的，谢谢您的建议

wzm123hzy

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0 R6 V) ?( p% L* J( X+ x$ `好的，谢谢您的建议