单个核细胞存储相关问题

鸵鸵

有没有做过脐血单个核细胞存储的啊？用的冻存液是什么？另外单个核细胞复苏后还需要用因子刺激再培养吗还是直接使用？

xieyun20052005

  i1 V! ]5 U1 N: t  c: \
1 h; Z/ e1 x2 M: g$ g  a9 e
这要看你使用的目的，要是激活别的细胞PBMC肯定要加相应的激活剂刺激的，PBMC仅仅是个种子细胞，根据需要添加不同的细胞因子。冻存的试剂可以是FBS:DMSO=9:1或者现在很多现成的冻存液可以直接使用，后可以实验一下，一般来说都是有死细胞的

zhoushuiguan123

脐带血复苏后需要培养后使用？不是直接复苏后直接使用啊，培养后再使用那还是造血干细胞吗？

sfnana

我冻存用过90%FBS+10%DMSO和70%培养基+20%FBS+10%DMSO 2种冻存液，第一种复苏后效果比较好。复苏之后最好先养1天，在根据实验需要加入诱导因子。

zhoujp3651

90%FBS+10%DMSO8 q0 _. O% L! D; _4 k" M
30%培养基+50%FBS+10%DMSO; _; |1 k5 P( J
70%培养基+20%FBS+10%DMSO
. e9 Y2 \# b  e; U4 m+ k8 A以上三种都可以，效率差不多

iytbxxg

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( x; a! S' ~' j/ z
: i9 t1 P  ~% n7 F9 Y非常感谢！！

UlissesJR

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3 P" l* O& t1 y. y! S* X$ t. D' o1 D! I( R
没问题，之前临床一直这么做，只要你冻存没问题

iytbxxg

回复 UlissesJR 的帖子3 c3 K- T4 W/ X% O7 R/ ~
, s  S* s2 X) \9 v4 i9 n
这样啊，活率会增高吗？谢谢啦！！

UlissesJR

冻存10%DMSO+90%的血清（如果有自体血浆，就用自体血浆），复苏后先着急加因子刺激，刚复苏的的细胞先加培养基（不含因子）在培养箱放3-4个小时，让细胞适应一下，这样细胞状态会好点，经验之谈

iytbxxg

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9 [4 S. X- b, ^; p5 C6 c: j8 u9 z! `4 C- H4 r" {
活率是多少算是正常的呢？都说pbmc冻存后复苏活率都低！