单个核细胞存储相关问题

鸵鸵

有没有做过脐血单个核细胞存储的啊？用的冻存液是什么？另外单个核细胞复苏后还需要用因子刺激再培养吗还是直接使用？

xieyun20052005

; S/ d1 s) i- G# A  J, K! G7 f+ i5 o. C1 H7 \
这要看你使用的目的，要是激活别的细胞PBMC肯定要加相应的激活剂刺激的，PBMC仅仅是个种子细胞，根据需要添加不同的细胞因子。冻存的试剂可以是FBS:DMSO=9:1或者现在很多现成的冻存液可以直接使用，后可以实验一下，一般来说都是有死细胞的

zhoushuiguan123

脐带血复苏后需要培养后使用？不是直接复苏后直接使用啊，培养后再使用那还是造血干细胞吗？

sfnana

我冻存用过90%FBS+10%DMSO和70%培养基+20%FBS+10%DMSO 2种冻存液，第一种复苏后效果比较好。复苏之后最好先养1天，在根据实验需要加入诱导因子。

zhoujp3651

90%FBS+10%DMSO) V) c. d5 G& L' ~; @9 V
30%培养基+50%FBS+10%DMSO2 q1 s: P. G: b' j( C) r$ p
70%培养基+20%FBS+10%DMSO
7 a9 B1 B3 d9 n, H6 g以上三种都可以，效率差不多

iytbxxg

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0 ]/ X: F1 R; v0 l/ [5 R
$ [- z" G7 [, {4 n9 V7 k$ G2 G% S非常感谢！！

UlissesJR

回复 iytbxxg 的帖子4 s8 I. y& a8 F* U' N7 l

3 W( Y6 y& i; ~) t1 B没问题，之前临床一直这么做，只要你冻存没问题

iytbxxg

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! a! I* V2 j  l0 e3 M  Y
0 y# Q2 q9 i- N) g这样啊，活率会增高吗？谢谢啦！！

UlissesJR

冻存10%DMSO+90%的血清（如果有自体血浆，就用自体血浆），复苏后先着急加因子刺激，刚复苏的的细胞先加培养基（不含因子）在培养箱放3-4个小时，让细胞适应一下，这样细胞状态会好点，经验之谈

iytbxxg

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6 K- ^1 d6 J6 ~9 a
2 V* \% G: v; t/ C活率是多少算是正常的呢？都说pbmc冻存后复苏活率都低！