肿瘤细胞球的消化 传代

lily132

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向各位同仁请教：我在做肿瘤细胞球的消化 传代时，每次都是消化后过几天细胞就死了，我用的是U251细胞，胶原酶胰酶都用过，这个问题老解决不了，谁知道如何消化传代呀？ 还有，我看不出来细胞球的形成是由单个细胞扩增而得，还是很多细胞聚集而成，如何鉴别呢？谢谢！
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cyperus

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# t2 [+ ^9 G: y* L6 @2 {
/ \" H2 a$ ~- M' M' t+ R+ a$ u@lily132你好
  ^  x8 J* k, ~# n9 T; o: H( }; p你说的肿瘤细胞球应该是用半固体培养基培养的肿瘤细胞成球实验吧。
3 ~* I. j4 ]$ g3 U- k/ p. H5 N感觉你使用的消化酶过于强力了。可能在消化时候对细胞造成损伤，你可以试试一些温和的消化方式来处理回收的细胞球。比如使用Accutase 37度15分钟放置来消化细胞球。0 y; w- y0 }8 _" `# ]
@还有，我看不出来细胞球的形成是由单个细胞扩增而得，还是很多细胞聚集而成，如何鉴别呢？
9 C, f/ d+ {) ?0 M: R这个不容易鉴别，但是你可以通过调整播种的细胞个数来保证细胞充分分散，这样形成的细胞球就可以被认为是单个细胞形成的。另外单个细胞形成的细胞球外表看起来会是一个比较规则的球形。9 |: Y8 Q0 ]6 k( |

5 F. J4 ~9 F$ [5 J# e7 B$ |9 l祝实验顺利。/ y- c" Y9 d2 q  d

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lily132

回复 cyperus 的帖子5 N9 Z! @" N/ e, ?. O7 K
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cyperus你好！4 h! o- L0 H; Y* p7 p: j
谢谢回复！我用的是无血清培养基成球实验，不是半固体培养基。我怕消化对细胞造成损伤，所以没用胰酶，用了胶原酶，胶原酶也损伤细胞吗？没试过Accutase, 下次试一下。& @# E# G1 i% v6 @
第二个问题，我种过多量的细胞数（2*105个/孔），也种过少量的细胞数（3000个/孔in 六孔板），细胞球都是规则的圆形。根据你的说法，只能种的少一些了。有个现象，即使种的少，细胞也有向孔中间聚集的现象，孔周围很少有细胞。

cyperus

回复 lily132 的帖子" A2 `, k0 e& Q$ D0 [5 d8 Q6 o

: N+ Y, g1 Z3 n. u+ l- e* dlily132你好6 j' T- A% p* F) ~7 C* w1 R4 a
U251细胞是贴壁细胞，如果放到普通培养皿里面会贴壁的。/ l4 `% o  U4 n7 K
1，你是否使用超低接触面培养皿？
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  ]% B7 n0 J  s' y7 [" u培养贴壁细胞球是需要半固体培养基的吧，soft agar之类的培养基让细胞悬浮在培养基李才有可能成球啊7 z  M$ u4 a/ h. h1 j0 y" o
细胞要种的稀薄一点才能成球。$ Y; Z4 E9 O. Z+ X7 J7 T
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lily132

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! r' L% S$ ?# @0 U5 x, ]cyperus你好5 r) E" e* U' Y
我用的是超低吸附的培养板, {; l0 y4 @4 s7 x/ X# i8 r2 d
我看很多资料上做细胞成球都是用DMEM/F12，我没用琼脂，也成球了啊，只是传代的问题老解决不了

lily132

回复 cyperus 的帖子% o1 w5 ^! e8 L  o2 `9 \

' x5 n0 n2 d- N* e# N, ^CYperus 你好
# d9 h  F1 Q/ J( z6 F# o请问Accutase 哪个厂家的呢？谢谢！

cyperus

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lily132，你好
1 }# j/ C- n: x* R  L1 p我们使用的是Innovative公司的。请点击以下链接查看消化液详情然后找中国的正规代理购买。
/ M8 j4 K0 w$ L- h) V祝 实验顺利
2 Q) h2 R6 L0 J( [9 N! _' I4 l; t- f# khttp://www.accutase.com/

lily132

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找到了，谢谢！