分离单核细胞离心多少转速？

免疫与细胞

我们关注的重点应该是离心力，并不是转速。离心机转子的半径不同，在相同转速下所产生的离心力也不同。因此不要用转速来表示，可以查查公式，换算一下，一般离心力不可以超过800g。国内外的文献上都有。

kaiyou

800g 15分钟。) B+ D: y8 K  ^! N
速度一定要慢升慢减，否则分离效果不佳。

冯君朝

1800rpm，升9降7，10min，

lccsiais

分过一次健康人PBMC的单个核细胞，离心条件是250G，15min，白膜层很清晰。0 h7 [: \9 _! O- ^/ A  ^* ~
就一般情况下的离心洗涤等，淋巴细胞虽然离心力高点，但也不要超过400G。

叶未落

" k3 b+ c. I( n  _- d. O+ P# h: ?
! \7 w7 z" ~- Y2 K; g" w) N1.       分离血浆，红细胞沉降  460rpm/min,5min
% [+ I( D/ R3 y: k+ H1 `2.        吸取上层血浆 离心 1700pm/min,5min. G9 V+ [3 h. N9 e( \7 r
3.        下层血细胞，生理盐水1倍稀释，离心 1600pm/min,5min

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分离单个核细胞用2000rpm/min,20min，最后洗涤1000rpm/min,10min，主要是为了洗涤血小板

Liyun65

每个离心机转速和离心力是不一样的，你最好看看你用的离心机的离心力，你的离心转速是有点太高了，我们用的是400g,4min。细胞状态还挺好的，就是血小板有点多，也在考虑要不要把离心力再降低一点。

qinchuanniu

1.        分离血浆，1800rpm/min,15min& z* v# B4 X3 N6 S, }
2.        吸取上层血浆，56℃、30min
" @4 @! ~& h8 f+ A, c# P8 f% i3.        下层血细胞，生理盐水1倍稀释，人淋巴细胞分离液分离，2100rpm/min,20min( [2 E+ L3 F6 O3 H, W. b
4.        吸取白膜层，生理盐水洗2次，1800rpm/min,15min
% M  y$ O7 x, _. W5.        细胞计数，加入培养基，CO2培养箱培养; W1 V, q5 ~) p; w/ z1 ^+ C

qinchuanniu

PBMC制备步骤' N) Z& B8 A9 X! v
PBMC的制备步骤见以下：
1 P/ b5 E# P! O0 q1) 将血袋中的血转移到离心管中，使用经灭菌消毒的剪刀剪断塑料管，小心把袋中的外周血倾倒入离心管中，将外周血袋热合封口。, N: ^; O8 }- f) j" B/ E$ _0 ?, q4 p  Q) {) m1 P
2) 离心分离出血浆，2000rpm，10min，室温离心。) ~" {# |' a$ {
- r( }7 E  a& M. u$ q$ K 3) 离心完毕后分层，吸取上层血浆层到离心管中，贴上血浆编码标记暂于4℃保存。3 T) C0 W4 s- m3 w  Y
4) 下层血细胞稀释：用生理盐水按1:1的比例稀释血细胞，混匀。! v0 h+ V( w" V8 ]) o8 A3 W+ p" L! g7 d. S1 s
5) 铺层加样：将稀释的血液样本缓慢匀速的加入到盛有室温的淋巴细胞分离液上方，两者比例约为1:1，铺层的整个过程都应注意不能打破淋巴分离液与血液样本的分界面。离心：2000rpm，20min，室温,慢升慢降。
# z/ h' Y, Q3 v6) 提取单个核细胞: 离心完毕后，离心管内出现明显分层，由下到上分别为：红细胞层、粒细胞层、ficoll层、单个核细胞层、血浆生理盐水层。吸取血浆生理盐水层弃之，直至距白膜层5mm处，小心将红细胞层之上的白膜层转移至50ml离心管中，补充生理盐水，细胞悬液与生理盐水比例大于1:3，混匀。4 Q: p$ }' ~/ m! R  s. I0 a8 |4 E1 N: L. I1 o/ N
7) 离心：2000rpm，10min，室温。% h9 ^0 {) l. i5 ~+ m( W- _5 D1 y$ C) T0 ?8 Y
8) 离心完毕后弃掉上清液，用40ml生理盐水重悬细胞沉淀，混匀，取0.5ml混匀悬液计数。离心：1500rpm，10min。# c3 j  K- L2 I; |
9) 离心完毕后收集上清液留作无菌检测，细胞沉淀即为目的细胞。
+ R' Z) Y) y. V5 G# f! E# q10) 以《中国药典》、《中国GMP实施指南》等为指导，针对前体细胞-外周血单个核细胞（PBMC）的分离、冻存、表型鉴定和功能检测等过程。

chenguangyu

300g 8min  or 400g6min