请问胶原酶I型或者V型消化组织需要加血清吗？

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请问胶原酶I型或者V型消化组织需要加血清吗？我看有些文献是用10%的血清，有些文献不需要用，为什么？

Demon_CN

一般不需要加FBS，如果消化浓度低时间长，隔夜那种，细胞又特别珍贵需要尽可能提高活率，建议还是加，
8 B+ m, p8 ~4 V& K细胞消化成单个或者小群体还是需要能量消耗的，有可能会受损。

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消化过程一般不加双抗，因为双抗消化过程对细胞也是有一定损害，一般在培养过程会加1%双抗

蒋佳焕

angelocream 发表于 2016-9-28 09:12
8 m1 c! M: N* g/ p0 s5 i胶原酶消化 不会被血清终止，而且血清有保护细胞的作用，所以在原代培养的时候为了保证细胞的生存率，我一般 ...

/ e6 g2 f6 }7 d/ {! ~' g, c学长，不知道你还看不看得到，请问你原代消化的时候还会添加双抗防止污染吗？是1%浓度吗？因为完全培养基也是这个浓度，所有不会对细胞产生太大的影响吧

蒋佳焕

angelocream 发表于 2016-9-28 09:12 ( h' \) U' Z8 }9 g
胶原酶消化 不会被血清终止，而且血清有保护细胞的作用，所以在原代培养的时候为了保证细胞的生存率，我一般 ...

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谢谢，终于解惑了* b# F6 E( q+ P7 T
我也是做原代，用的胶原酶
0 l' E6 z; Q2 p% @/ Q# _8 J! q; d师兄师姐都说血清会抑制酶的活性! ^- m7 l0 x! k( `
但是不加血清的话长时间消化后细胞活性很差

sfnana

长时间消化的时候最好加一点，可以保护细胞，短时间消化，不需要加。

免疫与细胞

不需要加，我们在做消化时从未加过，如果要终止消化，对胶原酶进行稀释离心去除就可以了。

angelocream

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7 f" [; v% y1 Y& Z, P, N) G) a. h% L* z. o0 I' {+ |
比如软骨细胞的消化时间是17h以上，有些组织消化时间更久，FBS能起到很好的保护作用，而且在特别的胶原酶的说明书上也有写需要加FBS。关于FBS残留的问题，FDA有一个详细的标准

qinchuanniu

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6 w4 m7 r3 Z5 N& a9 A' y; C9 @; I* V! m' g: B
加FBS会影响后边的临床应用，残留的FBS中BSA，也没有简便敏感的检测方法，这样的生产的细胞未必能通过严格的药监审核

风倾颜

不需要，用胰酶消化时加血清是因为血清中含有胰蛋白酶抑制剂，能够终止消化。而用胶原酶消化的时候，血清并不能终止胶原酶的消化，由于胶原酶硝化作用比较温和，消化结束的时候过滤离心就可以了 。