细胞复苏需要离心吗？

zhx1912

我养普通细胞一般都是直接复融后加到新鲜培养基中，不离心$ C! }% t" W/ ]  Y6 R9 s% H
7 H7 C9 f! ^/ D5 s2 Y
养饲养层MEF细胞以及ES细胞也可以不离心直接复苏吗？

sunny2829

回复 zhx1912 的帖子
# o6 f  f8 I6 D& F; h) [; `3 {% i) O& Q5 X1 ?
我们一般复苏细胞都离心除DMSO，因为DMSO具有毒性，对细胞有一定损伤。* y! K" n5 v9 c( i9 e
个人建议能离心还是离心吧。

yingfeixiang

复苏细胞一般都离心除DMSO，因为DMSO具有细胞毒性，对细胞有一定损伤。特殊要求除外

baby00000003

有些个细胞复苏培养，不讲究的时候可以不除DMSO，或者用的是不含DMSO的高级冻存液，就不用离心啦～
# \' H2 @7 f+ P至于你说的这些，可以试试看嘛～也许就能出一套新的protocol～

watchen198891

回复 zhx1912 的帖子' {5 Y! S6 M6 m4 p& {
9 [/ F6 N5 U: J3 k- d0 g
对于MEF细胞，可以离心也可以不离心，两种方式，如果不离心，就要在细胞接种后加入少量培养基，培养4-6h后换液，补充新鲜培养基。对于ES饲养层培养，必须离心，但是离心转速以及时间尽量减小，避免对ES过度伤害。

zhx1912

回复 watchen198891 的帖子6 z* y6 @# _, d: g) T

, R7 j7 v* Y2 y7 U* g0 C7 E谢谢你的建议！我认为离心对细胞损伤大过DMSO的毒性，所以对于贴壁细胞一般是复苏后换液

zhx1912

回复 baby00000003 的帖子
% P2 `! F; S! o* B, P" c5 E0 @/ A3 E  D3 y; ?
还有不含DMSO的高级冻存液，能告诉我品牌和货号吗？想了解了解，谢谢了~

zhx1912

回复 yingfeixiang 的帖子
, J' |* _# o4 c! B" j9 d: M. l' Y, G
谢谢！

zhx1912

回复 sunny2829 的帖子) Y) w) R) O1 e, f  s/ g) y
% U6 N* [; d3 t  A( e& U, C' B
这个毒性是对于细胞长期的生长有毒性还是仅仅在复苏后的几代有影响呢？我养细胞的习惯是贴壁细胞复苏时不离心，复苏后24小时换液；悬浮细胞直接复苏，DMSO被稀释到0.5%，细胞生长达到丰都后再稀释传代，DMSO已经接近0含量了。细胞生长以及活性方面都挺好的
* O" A" M% U# ~2 R$ P" R, Z) `( J0 @$ ?8 |* l) T
养细胞也有很多年了，一直都是这样操作的，只是最近接触干细胞，好多细节不是太明白，想向大家多了解了解7 c, M1 C2 t3 {( B5 P2 E% {6 \

baby00000003

回复 zhx1912 的帖子
. L5 G! N) x# ~- o, P. N/ m7 \" [( @& Z& f; R% H* }4 c) R  b4 {
http://www.zenoaq.jp/cellbanker/en/stem-cellbanker-dmso.html6 p5 K- j* [. `6 g* \; |
比如说这俩吧，曾经有人跟我推销过，未亲测