人胚胎干细胞实验室研究的十五个小窍门 - 胚胎干细胞专区干细胞之家



免疫细胞治疗专区	欢迎关注干细胞微信公众号

12 3 4 5 下一页

返回列表

查看: 160855\|回复: 43	go 人胚胎干细胞实验室研究的十五个小窍门 [复制链接]

shifan

新手上路

Rank: 1

积分: 14
威望: 14
包包: 54

楼主

发表于 2009-6-10 16:25 |只看该作者 |正序浏览 |打印

威斯康辛大学WiCell研究所“人类胚胎干细胞培养方法”培训班的首席培训师Daisy  Manning，在那里上了一堂人体胚胎干细胞研究的入门课。 " G3 h) A9 E, B/ r! p/ H
; t' B" o9 ?  l5 v
      Manning在一间专为学生实习准备的实验室里讲授了这堂人体胚胎干细胞研究速成课。在这里学习过的学生已经达到230人。课程涵盖所有关于培养干细胞的基础知识，从准备鼠胚胎纤维原细胞培养基支持层，到冷冻人体胚胎干细胞等等，除了定向分化以外的每一个步骤。 & w0 Q/ J+ P  B9 P* L
# U. i" u2 g- @  y
      Manning不仅鼓励那些想在自己学校开始干细胞研究计划的人们参加课程，还鼓励所有符合条件的的研究者来这里上课：“我经常说的一句话就是，如果你在这里犯过一个错误，这是件好事，因为这样一来等你回到自己的实验室时，就不会再犯第二次了。”

      1．抓紧时间、耐心等待
% G4 u7 o3 F$ b( d' \+ o
      Manning告诉这位编辑：“我们让学员们了解到人体胚胎干细胞研究不是个短期工作，即使实验室中一切都已经就绪，那最少还要花费十六周时间才能完成从衍生鼠胚胎纤维原细胞到完全培养出大量人体胚胎干细胞然后进行冷冻。所以，整个细胞实验过程在有完备实验室的条件下也要花费四到六个月。” # q5 b; [' r) R' g& S

      2.  千万不要购买商业性的鼠胚胎纤维原细胞 " R$ E; M3 p  L+ ]: ~2 K/ O

      虽然能买到鼠胚胎纤维原细胞，但是WiCell研究所建议还是自己培养为妙。“从怀孕的母鼠体内能够获得12到15瓶，成本只有26美元。如果从商业市场购买的话，4瓶鼠胚胎纤维原细胞就要花掉50美元，也就是说用两倍的价格只能得到六分之一的细胞。此外，买回来的根本就不知道是什么样的鼠胚胎纤维原细胞。通常最多只能用到第五代细胞，因为之后这些细胞会大量死亡，有些供应商出售第三代或第四代的鼠胚胎纤维原细胞，这样一来它们对于胚胎肝细胞培养来说根本毫无用处。”

      3.  检查辐射源 6 b2 a9 l* x+ `$ c' G

      研究过程中，必须使用辐照来暂停生长。Manning  表示，WiCell研究所的规定要求辐照剂量应该为8000拉德（辐射剂量单位），但这是一个变量。“因为我们在实验发现，随着辐照源的不同，辐照量也会变化，”她补充说。“对于铯辐照器来说，8000拉德正好，但是对于X射线来说，辐照量需要在12000拉德以上。”虽然这一过程可以使用丝裂霉素C来代替，但是Manning建议还是尽量使用辐照的方法。“胚胎干细胞对化学药品十分敏感，”她解释说。“当你用化学药剂来钝化鼠胚胎纤维原细胞时，一定要保证在加入胚胎干细胞前清除了所有的化学药剂。”

      4.  快速解冻！ % }  Y" Q$ z$ Z0 T6 a- e) I; Z
- c3 h: N$ s8 [/ Y+ B) v5 Y
      Manning告诉这位编辑：“尽可能快地解冻细胞。这是因为我发现有几次我和另一位学员解冻的细胞在几乎同等条件下，她最后所得到的细胞团只有我的50%左右。虽然我们使用的时间只有30到45秒左右的差距，但是最后我们所取得的结果差别很大。”她建议，尽可能在实际解冻胚胎干细胞前按照要求操作几次，这样有助于减少浪费时间。