人胚胎干细胞实验室研究的十五个小窍门

hualin840518

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zpzp0312

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shifan

10．避免“挑选保留” 2 p9 e8 l& M6 b8 c
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        Manning表示，如果一个研究者经常需要使用“挑选保留”的方法的话，那么他的操作可能有问题。“一般来说培养过程中每隔一代就要做一次挑选移除工作，这个时间段或许有小许误差，而且绝对不能打断分化过程。如果每隔一个月或每三个月就要做一次挑选保留工作的话，就有问题了。” + Y! `( _( |+ h; C& A/ t& l) [
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        11．  别做完美主义者 8 g; }9 e! C$ o# t+ {. ~$ A# ^
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        Manning告诫这位编辑说，过于频繁的挑拣会导致异常细胞出现，所以千万别做完美主义者。她补充说，也许研究者会看到培养板上有2%或3%的分化部分，那并不算什么，而且这些细胞团完全正常，但是如果每个月研究者都不停地进行挑拣，让培养基上完全没有分化的部分，那么很有后可能会导致产生诸如三体型12或17这样的异常现象。“所以不要过于热切。
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/ V8 K5 Z7 F! o7 `        12．  千万别用抗生素
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4 r/ C" q% K  g7 W; I        “我们发现如果细胞培养方法和消毒手段都很完善，那么根本没有必要使用抗生素，”  Manning说。此外，它们会严重地损害培养基。“你不知道在加入了另外一种成分后，它对胚胎肝细胞会产生什么样的影响。这些抗生素可能会导致异常细胞的产生。” - {9 J( v9 `9 @4 U6 j% Z. i
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        13．  别忘了染色体组型
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        WiCell研究院对第二十代和二十五代细胞进行染色体分类，这样来保证它们拥有正常基因。Manning说：“我们建议研究者在开始实验前就进行染色体分类，这样能够保证它们都处于正常状态。然后，在开始收集、发表大量数据时，一定要再次进行检查，而且我们认为在第五十代以后，每十代就要进行一次染色体分类。”
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        14．及早、经常冷冻细胞
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        Manning说，在解冻后尽快积累一些备用冷冻胚胎细胞，一旦研究者开始冷冻后，总是希望尽快完成这一过程，因为这样才能将传代细胞的数量降到最低。千万别等到细胞越来越多的时候才开始冷冻过程。细胞在能够分裂的前两天就应该冷冻起来，而到了第五天它们的生长最快，也最需要快速解冻。 3 M) x( `7 B6 d! P5 |2 E, P) Y0 m
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        15．这是一份全职工作
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% k7 p9 I/ r% e/ \  V- F        Manning强调说，人体胚胎细胞培养实际上并不清闲。培养鼠胚胎纤维原细胞与分裂培养人体胚胎细胞的过程就需要每周20小时以上的时间。这样，研究者就必须训练一个助手在自己生病或休假的时候来培养细胞。“一个人单独做这份工作实在是太费心了，所以一定要找个帮手，”她说。

shifan

5.  两周的等待 1 k- ~& C5 _$ M  [
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        别想着在解冻后很快就会培养出大量的细胞，在这一过程中只有0.1%  到  1%的细胞能够存活下来。Manning说：“我们一直告诉学员们每天都要注意它们的发展，因为细胞团随时可能会出现，也许三、五天，甚至七、八天，突然之间你就会发现细胞团出现了。”解冻十四天后还没有出现细胞团并不意味着实验失败，而且不要忽视外表组织的边缘，她补充说。“因为很多时候这些部位会出现大量的细胞团。”（用手指放在外表组织的边缘挡住光线衍射就能看到。）
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! d; |7 o  z" _. u: H0 ?        6.  每天对细胞的培养
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+ g- o. O) Q6 r        要每天观察人体胚胎肝细胞的生长过程并添加养分。“而且永远别让它们过量生长，一般来说这些细胞每周会分裂一次。”人体胚胎干细胞的机构紧密、均匀而且边缘清晰，而分化出的细胞团参差不齐、边缘凌乱或者有透明的中心点。在低倍数的放大镜下，健康的细胞团发白，而那些在溶液中发黄的细胞团类似发育中的胚胎很有可能会分化。
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5 ~9 d8 [1 t7 j  M; P        7．越多关注、越多收获
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* k, d! v3 K* `9 K; S7 K        经验丰富的人体胚胎干细胞研究者一般都十分关注细胞的生长过程。“如果一个研究者关注细胞的生长，就会花费很多时间用显微镜观察它们，而且会熟悉分化前这些细胞的外表特征。久而久之，他就能学会预测下一步细胞会产生什么样的变化。”  Manning补充说，因为人体胚胎肝细胞比其他科学研究更讲究，所以很多东西在课堂上是无法传授的，但是培训课程能够帮助学员学会如何做出正确的判断。
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# V6 U+ f- T, [) o) n$ b6 G8 n        8．  分化开始
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0 C6 d: Y9 z! y; H  A! ~        ESC分化虽然会给细胞的培养带来一些困难，但这也是件好事，它表明培养基很健康。如果培养基没有出现任何问题，那么很有能已发生了什么问题。“当胚胎肝细胞突然生长的很快，很健康，而且从未分化过，那么你就该想想是否有什么地方出了问题，”  Manning解释说。 6 g8 B4 J4 V3 `! G7 i; J: W  @2 }+ l  w

4 j8 D; [: x  J0 \        9．决定研究步骤
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        Manning  告诉这位编辑：“对于如何处理人体胚胎肝细胞培养板，我们有一条不成文的规定：那就是对于分化率为10%的培养板，我们不做任何处理；如果分化率在10%到50%之间，我们会用一种叫做‘挑选移除’的方法去掉分化了的细胞；如果分化率大于50%，用‘挑选保留’的方法借助机械将未分化的细胞团转移到一个新的鼠胚胎纤维原细胞培养板上。”