细胞培养的微生物污染排除

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一、抗生素除菌法：用BM－1（截耳素衍生物）和BM－2（四环素衍生物）抑制支原体' k% ~  |. E. [( S

8 D' O3 Q3 y" u  ~1．抗生素制备：均可用PBS配成250×浓缩液－20℃备用，使用浓度参考《组织培养和分子细胞学技术》117页表6－2。  m5 B8 @* U% [% v, ^

9 G) |7 n0 r8 X3 a; H2．处理：取受支原体污染的细胞，吸除培养液，加入含BM-1的1640培养液培养3天后，吸除培养液，再加入含BM-2的1640培养液培养4天，如此连续三个轮回。
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1 a5 ]# P3 C! m' L  R3．检测：用33258荧光染色镜检（每个轮回末应检测一次）。
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4．培养：清除支原体后的细胞，在不加上述抗生素的培养液中，再传代培养3～4次。6 v# ?' N$ m5 z# d
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5．镜检：如清除不彻底可再进行处理至纯净为止（一般3个轮回即能被完全消除）。BM-1和BM-2与CIP（4-氟，2-羟基喹啉）联合应用亦可，即先用含BIP培养液培养12天后，再按上述方法处理。 ( k1 ^+ k% y& z4 E6 V, Y7 m% Z

. m4 \$ P" h" k0 l; y) b二、加温除菌法：把受污染的细胞置41℃中作用5～10小时。 $ l+ c( P* X" {1 v/ s1 \  V6 Y

$ e9 i9 e1 _& v三、动物体内接种除菌法：把受支原体污染的肿瘤细胞接种在同种动物皮下或腹腔中，借动物免疫系统消灭支原体，而肿瘤细胞却能在体内继续生长，待一定时间后，从体内取出细胞再进行培养繁殖。( t7 B# C, N# U4 k, B

# `6 d% P- U5 y3 _四、巨噬细胞吞噬法：从动物腹腔采取巨噬细胞，为排除其它细胞成分，可先进行纯化，然后再加入被支原体污染的细胞培养液中混合培养。在培养过程中，为检查支原体是否已被消除干净，可利用支持物培养法验证，取出支持物逐日染色、镜检观察，至支原体已被消除干净为止。