BMSC原代培养

苏木素黎

大家好，我是个培养骨髓间充质干细胞的菜鸟，到目前为止，做过三次原代培养，都不成功，遇到的问题如下：首先，我的杂细胞很多，一只SD大鼠可以分到3个60mm的培养皿中进行培养，里面很多杂细胞，应该会影响BMSC的生长吧，其次，细胞形态也不对，不像文献中查到的那种规整的呈旋涡状的梭形，到2代或3代的细胞就跟老化了的细胞似的，细胞很大，形状不规则，折光性弱，立体感渐渐变弱。在这里请教一下大家，是什么原因造成的？
- ^3 s! h- m+ T1 K+ V: |3 I我用的是全骨髓贴壁法，血清为BI的human MSC专用FBS，现在已更名为MSC专用FBS，全培基含血清10%，培养基为Sigma的DMEM/F12粉末，自己配制，用前加双抗和丙酮酸钠，培基，PBS，双抗，胰酶等均为自己实验室配制的，用来养癌细胞和RAW264.7细胞也都可以，所以说试剂是自己配制会是原代做的不成功的可能原因吗？血清是2014年12月12日分装的，没有过期，一直保存在—20℃的冰箱中，这个有影响吗？期待大家的建议及意见，先谢谢啦！

xieyun20052005

你自己分析的是正确的，我养过人的骨髓间充质干细胞，很好养的，一般原代一周基本就长满了，你换一下培养基现在很多培养骨髓干细胞的培养基或者基础培养基加血清替代物，一般问题不大，都是商品化的

xieyun20052005

而且我认为你的全骨髓贴壁法也不正确，最好是密度梯度离心，直接全骨髓贴壁杂质太多了

wzm123hzy

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您好，想请教一下，如何实现密度梯度离心？需要特殊的离心机吗？谢谢

xieyun20052005

用淋巴细胞分离液即可，不需要特殊的离心机，就是能到2000-3000rpm即可

wzm123hzy

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7 U8 c7 Y+ i/ m- T! Q好的，谢谢您