荧光定量PCR作标准曲线，老是做不好。求指导

liuyanly35

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荧光定量PCR作标准曲线，老是做不好。求指导。

cxs

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2 f  F( V+ ]2 M  J' `你应该将你做的详细过程描述一下，比如：倍比稀释怎么稀释的，用的多少ul稀释的（我不知道现在的成品试剂盒是不是已经给你稀释好了，我们以前要自己稀释）？你所指的做不好是怎么个不好法？最好放几张显著一点的图出来，这样才有办法分析。

telomerase

公司的标准品做的有问题，那就是你的仪器或标准品的事，仪器可能里面某些孔检测灵敏度不行了，换一换位置。标准品换一批。8 {# C& p8 k' e3 J5 f8 ~
手法的问题，找个老人儿替你过一把，你看看人家怎么做的，小细节有哪些
  w& ?7 L, E& T& \2 R9 i6 i% N% c" a9 U8 p! Z) I
自配的话，稀释时体积大一点（如1：10，别总是1微到9微，用个5微到45或10到90）.一枪配下来，中间不换枪头。  

追风筝的July

主要检查配置标准曲线的操作是否有问题。首先，稀释，建议10到100，千万不要1到10，这个超不准。其次，在加入高浓度待稀释的标准品时，是否使用同一个吸头来回混匀，这是一个很严重的错误，一定要换吸头，混匀！手动来回吹打50次以上，肯定是可以的。手动不行的话，换成仪器上混匀，也是可以的。而且，待稀释的标准品要加到稀释液一下。