请教：细胞蛋白质提取方法推荐

have-a-rest

大家在做western blotting的时候，蛋白是怎么裂解的啊，有没有比较过哪种方法最适合裂解干细胞及其衍生物？

mansnoopy

回复 have-a-rest 的帖子: j- k4 ]) X9 y: N6 B8 U
; V) A% e/ X  p' H: e) \
lysis buffer

Helena110

回复 玫瑰 的帖子
7 g$ S9 T. ^. l% C- I' X  d- M) _* T6 p5 s
学习了 谢谢

oklai

能多解解说说明明吗吗

oklai

好帖子就是有人看啊

yueyongheng

用PBS洗净细胞后，先用RIPA裂解，然后超声破碎，最后加入SDS样品Buffer煮沸10分钟。$ E2 A+ t+ E/ K
除了煮沸步骤外其他步骤建议冰浴操作。
# ?7 ^5 S$ t- c) ~9 N仅列举了一种，如果条件允许的话建议同一细胞样品选择几种方式来制备。

hdc2001

细胞内蛋白质的提取：$ z2 C: x0 d3 _7 a0 O( W! D9 C
1、Trixon-100或NP-40裂解液裂解；# Y, M# w; k: `
2、冻融裂解法；
' ^& j9 O. u/ ^5 q3、研磨法；# H) L' {( X7 ]% _% ]3 d6 \& |
方法很多的，可根据实际情况选择的啊。

我爱光明2009

也在考虑这个问题，实验后再交流！

have-a-rest

谢谢各位！

telomerase

提干细胞，我觉得应该和普通一样的。 都是细胞啊！
0 g! O0 K2 x% @7 H经典的就是分子克隆2讲的，用RIPA裂解，然后刮下来，冰裕30min，超生，4度离心10min
$ {2 m: |+ G1 \+ O4 x) E* B10000g
# d& x4 B/ L: u& Z) a, I. H1 {, S1 l) ^6 X4 h
关键在于蛋白酶抑制剂好不好用
5 w3 a, z+ ~! N9 f: I+ X1 Z$ S8 O) [' G
我师姐按分子克隆配的就好使，我怎么配也不好用，当然没买cocktail6 P2 N1 j: ^$ C6 R! M, P
你既然做干细胞，就表明你老板不缺钱。建议你不要配裂解液了，买个盒子吧。4 _! l& _3 v- F  Y1 g+ k
这个由不要好多钱。比干细胞的那些因子，便宜的多了。  不要自己配得不好用，摔在这里！！！