请教：细胞蛋白质提取方法推荐

have-a-rest

大家在做western blotting的时候，蛋白是怎么裂解的啊，有没有比较过哪种方法最适合裂解干细胞及其衍生物？

mansnoopy

回复 have-a-rest 的帖子
2 W4 x$ B1 c) T0 U- X
5 _" @! V* `! d2 S9 f1 o: G' q5 `lysis buffer

Helena110

回复 玫瑰 的帖子, F6 H0 ^$ D; B% D: Y& i3 ?* \
/ {4 Q( \$ h$ _3 I' p
学习了 谢谢

oklai

能多解解说说明明吗吗

oklai

好帖子就是有人看啊

yueyongheng

用PBS洗净细胞后，先用RIPA裂解，然后超声破碎，最后加入SDS样品Buffer煮沸10分钟。3 B2 u2 ^0 u& b: T1 _: W1 h) l# a3 P
除了煮沸步骤外其他步骤建议冰浴操作。
4 Q6 o& L* ~2 u9 g6 M仅列举了一种，如果条件允许的话建议同一细胞样品选择几种方式来制备。

hdc2001

细胞内蛋白质的提取：
7 P2 q: s: w" Y% W1、Trixon-100或NP-40裂解液裂解；$ y! G; a$ w# F" h! z) U: y9 i) c$ p+ \
2、冻融裂解法；
" I$ s5 x# M/ y3、研磨法；
' ?' f* f/ Z' N% ]" `3 b4 _方法很多的，可根据实际情况选择的啊。

我爱光明2009

也在考虑这个问题，实验后再交流！

have-a-rest

谢谢各位！

telomerase

提干细胞，我觉得应该和普通一样的。 都是细胞啊！+ Y  e) _1 Z2 \  P' u2 p- y5 l
经典的就是分子克隆2讲的，用RIPA裂解，然后刮下来，冰裕30min，超生，4度离心10min
' R9 M) l1 _4 A( J- w10000g
8 a  O7 Q0 I8 s2 g5 F% D, m8 e9 \; M
6 j# I0 j8 _  ?  C4 W& {关键在于蛋白酶抑制剂好不好用6 }% K9 C) t# G0 [" L
! P5 E( Z+ f' r+ e7 G
我师姐按分子克隆配的就好使，我怎么配也不好用，当然没买cocktail
8 p! W1 T+ @, ?2 p) J5 Q你既然做干细胞，就表明你老板不缺钱。建议你不要配裂解液了，买个盒子吧。3 y% G' P0 P# F4 t! H
这个由不要好多钱。比干细胞的那些因子，便宜的多了。  不要自己配得不好用，摔在这里！！！